2023-09-27
摘要：
本品為未知含(han)量(liang)及(ji)種類的氨(an)基(ji)酸(suan)(suan)配制(zhi)而成的透明(ming)膠質類物(wu)質，使用Biochrom30+全自動(dong)氨(an)基(ji)酸(suan)(suan)分析儀，對其(qi)所含(han)的游離氨(an)基(ji)酸(suan)(suan)組分及(ji)含(han)量(liang)進(jin)行分析。結果表明(ming)該未知樣中(zhong)氨(an)基(ji)酸(suan)(suan)各單個氨(an)基(ji)酸(suan)(suan)含(han)量(liang)的濃(nong)度見附頁結果表。其(qi)中(zhong)樣AE01氨(an)基(ji)酸(suan)(suan)總(zong)含(han)量(liang)為31.969 umol/mL，AE03氨(an)基(ji)酸(suan)(suan)總(zong)含(han)量(liang)為36.790 umol/mL。
一、樣品前處理
1、所用試劑
1.1 Loading Buffer：鈉鹽系(xi)統，pH 2.2
1.2 濃(nong)鹽酸，濃(nong)度≥36%,優級純
1.3 6mol/L 鹽酸：取(qu)500mL 鹽酸加水(shui)稀(xi)釋至1000mL,混勻
1.4 水：去離(li)子水
1.5 17種(zhong)氨基(ji)酸標(biao)準品
2、前處理設備
1) 分(fen)析天(tian)平:精度(du)為 0.0001g
2) 移液槍及槍頭
3) 一次性注射(she)器(qi)及(ji)0.22um濾膜(mo)
4) 低范(fan)圍pH試紙
5) 真空干燥烘箱
6) 無油真空泵
7) 電(dian)熱(re)平板(ban)及稱量(liang)瓶
3、樣品制備（參考shipinzhongAAS的測定）
移(yi)液(ye)槍準確移(yi)取(qu)試(shi)樣(yang)1mL，加入(ru)(ru)水解(jie)管中，加入(ru)(ru)10mL 6mol/L鹽酸(1.3)，冷凍3min?5min,接到(dao)真空(kong)(kong)泵的(de)抽(chou)氣管上(shang),抽(chou)真空(kong)(kong)(接近0Pa),然(ran)后充(chong)(chong)(chong)入(ru)(ru)氮(dan)氣,重復(fu)抽(chou)真空(kong)(kong)-充(chong)(chong)(chong)入(ru)(ru)氮(dan)氣步驟3次后,在充(chong)(chong)(chong)氮(dan)氣狀(zhuang)態下擰緊螺蓋。將水解(jie)管放入(ru)(ru)真空(kong)(kong)干燥箱中，110°C水解(jie)22-24h，冷卻、混勻、開管、轉(zhuan)移(yi)并定(ding)容(rong)到(dao)50ml容(rong)量瓶(ping)(ping)中，用(yong)移(yi)液(ye)槍取(qu)適量水解(jie)液(ye)于(yu)稱量瓶(ping)(ping)中，在電熱平板上(shang)60℃濃縮至干，必要時加入(ru)(ru)少許水(1.4)，重復(fu)蒸干1-2次，加入(ru)(ru)適量PH2.2的(de)稀(xi)釋上(shang)機用(yong)檸檬酸鈉緩(huan)沖液(ye)溶解(jie)(1.1),振蕩混勻后,吸取(qu)溶液(ye)通過0.22 μm 濾膜后,轉(zhuan)移(yi)至進(jin)樣(yang)瓶(ping)(ping),為樣(yang)品測定(ding)液(ye),供儀器測定(ding)用(yong)。
二、分析方法描述（Biochrom 30+）
氨基酸分析儀分析方法參數：
1) 色(se)譜(pu)柱(zhu)：Biochrom Na型陽離(li)子交換樹脂柱(zhu)，4.6′20cm
2) 分離程序：
運行時(shi)間(jian)：經分析時(shi)間(jian)+再生(sheng)時(shi)間(jian) 59.35min
3) 反應(ying)單(dan)元溫(wen)度(du)：135°C
4) 檢測波長：570nm、440nm同時檢測
三、樣品中氨基酸(suan)含量的計算
樣品測定液氨基酸的含量按式(1)計算：
Ci = Cs/As × Ai× F ··········(1)式中:
Ci ——樣品測定液氨(an)基酸(suan)i的含量,單位為(wei)納摩爾(er)每(mei)毫升(nmol/mL);
Cs ——氨基酸(suan)標準工作液氨基酸(suan)s的含量,單位為納摩爾每毫(hao)升(sheng)(nmol/mL);
Ai ——試樣測定液氨基酸i的峰面(mian)積;
As ——氨基(ji)酸(suan)標(biao)準工(gong)作液氨基(ji)酸(suan)s的峰面積;
F ——樣品稀釋倍數(shu)。
附、透明膠質類中的蛋白水解氨基酸其分析圖譜及做樣結果：
圖1. 樣品AE01
圖2. 樣品AE03
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