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概要

多劑量(liang)瓶(MDV)廣泛用(yong)于(yu)大多數(shu)生物制藥(yao)，在使(shi)用(yong)前會被抽取到(dao)(dao)塑料注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)(qi)中(zhong)。然而(er)，使(shi)用(yong)含有硅(gui)油的(de)(de)塑料注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)(qi)(SO注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)(qi))處理治療性蛋白質(zhi)時形(xing)(xing)成(cheng)(cheng)的(de)(de)可分(fen)解(jie)顆(ke)粒(li)(li)(li)(li)可能存在問題。本研究旨在評估含有人免疫球蛋白(IgG)和(he)(he)脂質(zhi)納米顆(ke)粒(li)(li)(li)(li)(LNPs)的(de)(de)MDV重(zhong)新包(bao)裝注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)(qi)中(zhong)微(wei)(wei)粒(li)(li)(li)(li)(>1 μm)形(xing)(xing)成(cheng)(cheng)和(he)(he)積(ji)累的(de)(de)程度(du)和(he)(he)趨勢。采(cai)用(yong)光阻法(LO)和(he)(he)流動成(cheng)(cheng)像(FI)對微(wei)(wei)粒(li)(li)(li)(li)進行分(fen)析。使(shi)用(yong)SO注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)(qi)觀察(cha)到(dao)(dao)的(de)(de)微(wei)(wei)粒(li)(li)(li)(li)數(shu)量(liang)大于(yu)不含SO注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)(qi)，并且微(wei)(wei)粒(li)(li)(li)(li)數(shu)量(liang)隨著兩種藥(yao)物在注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)(qi)中(zhong)重(zhong)新包(bao)裝的(de)(de)次數(shu)不斷增加。然而(er)，在不同品(pin)牌的(de)(de)SO注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)(qi)中(zhong)觀察(cha)到(dao)(dao)很大的(de)(de)差(cha)異。相(xiang)比之(zhi)下，使(shi)用(yong)一種不同的(de)(de)技術從(cong)小(xiao)瓶中(zhong)提取藥(yao)物顯(xian)著減少了(le)微(wei)(wei)粒(li)(li)(li)(li)的(de)(de)數(shu)量(liang)。此外，使(shi)用(yong)集成(cheng)(cheng)過濾(lv)針(zhen)或(huo)在配(pei)方(fang)中(zhong)加入(ru)穩定劑如(ru)乙酰(xian)精氨酸(suan)和(he)(he)Tween 20也有助于(yu)減少顆(ke)粒(li)(li)(li)(li)的(de)(de)形(xing)(xing)成(cheng)(cheng)。

一、簡介

多劑量(liang)瓶(mdv)比單劑量(liang)瓶(sdv)或預充注(zhu)射(she)器(qi)(qi)具(ju)有顯(xian)著的(de)(de)經濟和后(hou)勤優勢(shi)，特(te)別是在(zai)大規模免疫規劃(hua)中(zhong)。mdv是密封的(de)(de)容器(qi)(qi)，允許連續提取藥物部分而(er)不(bu)改變殘留部分的(de)(de)質量(liang)，包括(kuo)純度、濃度和無菌。mdv被廣泛用(yong)于(yu)Covid- 19疫苗，包括(kuo)Moderna和輝瑞的(de)(de)疫苗。然(ran)而(er)，已經報道了(le)一(yi)些(xie)使用(yong)注(zhu)射(she)器(qi)(qi)將藥物從mdv中(zhong)重新包裝的(de)(de)不(bu)良事件，如微(wei)生物污染(ran)、形成可見顆粒和導(dao)致免疫反應。一(yi)項研究報道了(le)使用(yong)mdv治療聚(ju)乙二醇肽可導(dao)致過(guo)敏反應和死亡。對(dui)于(yu)可見微(wei)粒，MDV批次中(zhong)觀(guan)察到的(de)(de)微(wei)粒數(shu)量(liang)(>1 μm)高于(yu)SDV批次，這表明(ming)過(guo)敏反應與MDV中(zhong)微(wei)粒的(de)(de)產生有關。

使(shi)用硅(gui)油(you)注(zhu)(zhu)射器(qi)(qi)(SO注(zhu)(zhu)射器(qi)(qi))可(ke)增加微(wei)粒(li)的(de)(de)(de)生(sheng)成(cheng)已被廣泛研(yan)究(jiu)(jiu)(jiu)。研(yan)究(jiu)(jiu)(jiu)表(biao)明，由于硅(gui)油(you)的(de)(de)(de)存在(zai)(zai)(zai)，亞(ya)可(ke)見顆粒(li)的(de)(de)(de)形(xing)成(cheng)增加，而(er)彈射或(huo)掉落(luo)注(zhu)(zhu)射器(qi)(qi)等機械應(ying)力(li)進(jin)一步增加了(le)顆粒(li)的(de)(de)(de)形(xing)成(cheng)。硅(gui)油(you)誘(you)導的(de)(de)(de)微(wei)粒(li)可(ke)使(shi)患者(zhe)發生(sheng)免(mian)疫(yi)原性反(fan)應(ying)的(de)(de)(de)風險較高。Chisholm等人(ren)(2016)的(de)(de)(de)研(yan)究(jiu)(jiu)(jiu)表(biao)明，蛋(dan)白質吸(xi)附(fu)的(de)(de)(de)硅(gui)油(you)微(wei)粒(li)破(po)壞了(le)對重(zhong)組(zu)蛋(dan)白的(de)(de)(de)免(mian)疫(yi)耐受和抗體反(fan)應(ying)。其(qi)他幾項(xiang)研(yan)究(jiu)(jiu)(jiu)報(bao)告稱(cheng)，在(zai)(zai)(zai)通(tong)過胰島(dao)素(su)(su)注(zhu)(zhu)射器(qi)(qi)進(jin)行玻(bo)璃(li)體內注(zhu)(zhu)射后，患者(zhe)的(de)(de)(de)玻(bo)璃(li)體腔中存在(zai)(zai)(zai)硅(gui)油(you)滴(或(huo)飛蚊癥(zheng))，這促使(shi)美國視(shi)網膜專家協會發布了(le)關于胰島(dao)素(su)(su)注(zhu)(zhu)射器(qi)(qi)中硅(gui)油(you)滴的(de)(de)(de)警報(bao)。預(yu)充注(zhu)(zhu)射器(qi)(qi)或(huo)針(zhen)管產品可(ke)以替(ti)代塑料注(zhu)(zhu)射器(qi)(qi)。然(ran)而(er)，據(ju)報(bao)道(dao)，主因是(shi)在(zai)(zai)(zai)包裝從(cong)小(xiao)瓶切(qie)換到預(yu)充注(zhu)(zhu)射器(qi)(qi)的(de)(de)(de)情況下(xia)形(xing)成(cheng)了(le)蛋(dan)白質聚集(ji)。說得更加具體的(de)(de)(de)是(shi)蛋(dan)白質暴露在(zai)(zai)(zai)某些(xie)產品中的(de)(de)(de)硅(gui)油(you)中，否則在(zai)(zai)(zai)小(xiao)瓶中可(ke)能不(bu)會遇到。

圖1所示。圖示演示了從小瓶(ping)中(zhong)提取藥物的常規(gui)逐步指導(dao)(稱(cheng)為“來(lai)回運動")

盡管有關(guan)于SO注射(she)器(qi)不良(liang)反應(ying)的(de)報道，但在大多(duo)數(shu)臨床或非臨床環(huan)境中(zhong)沒有采取緩解措施(shi)。此外，MDV的(de)劑(ji)量大小(xiao)為每瓶(ping)(ping)2至(zhi)20劑(ji)，大多(duo)數(shu)兒童免疫接(jie)種為每瓶(ping)(ping)10或20劑(ji)，這(zhe)可能(neng)會增(zeng)加(jia)硅油從注射(she)器(qi)滲入到小(xiao)瓶(ping)(ping)的(de)風險(xian)。一(yi)項研究報道，將貝伐珠單抗從小(xiao)瓶(ping)(ping)重(zhong)新包(bao)裝(zhuang)到SO注射(she)器(qi)中(zhong)導致藥(yao)(yao)物濃(nong)度下(xia)降10%，微米級蛋白顆(ke)粒(>1 μm)大幅增(zeng)加(jia)，隨后患者(zhe)眼(yan)壓升高。另一(yi)項來自復(fu)合藥(yao)(yao)房(fang)的(de)重(zhong)新包(bao)裝(zhuang)貝伐珠單抗樣本的(de)研究表明，硅油是(shi)顆(ke)粒數(shu)量增(zeng)加(jia)的(de)病原體。因(yin)此，了解與使用mdv和SO注射(she)器(qi)相關(guan)的(de)風險(xian)至(zhi)關(guan)重(zhong)要。

考慮到這些問題，本研究旨(zhi)在量化由于使用SO注射(she)器而(er)在MDV中(zhong)形成的(de)亞可(ke)見顆(ke)(ke)粒及其(qi)積累(lei)趨勢。我(wo)們模仿了在臨床(chuang)環境中(zhong)從小(xiao)(xiao)瓶中(zhong)取(qu)出藥物的(de)技(ji)(ji)術，這些技(ji)(ji)術也在幾個指(zhi)南中(zhong)提供(圖1)。以肌內γ-球蛋白(IgG)和(he)空脂(zhi)質納(na)米顆(ke)(ke)粒(LNPs)為(wei)模型藥物。每個小(xiao)(xiao)瓶中(zhong)的(de)樣品被重新包裝成8個不同品牌(pai)的(de)注射(she)器，而(er)只研究了、第(di)(di)四、第(di)(di)七和(he)第(di)(di)八支注射(she)器。光(guang)阻法(fa)(LO)測定顆(ke)(ke)粒數。雖(sui)然LO通常用于計算(suan)亞可(ke)見顆(ke)(ke)粒，但它不能(neng)計算(suan)半透明顆(ke)(ke)粒，并(bing)且可(ke)能(neng)錯誤標記顆(ke)(ke)粒大小(xiao)(xiao)。因此，將(jiang)流(liu)式成像(xiang)(FI)技(ji)(ji)術與LO技(ji)(ji)術結合使用，以確(que)(que)定顆(ke)(ke)粒計數并(bing)區分顆(ke)(ke)粒的(de)形態。通過FT-IR和(he)評估其(qi)重量差來確(que)(que)認(ren)硅油(you)的(de)存(cun)在。

二、材料與方法

2.1 材料和樣品制備

編號:020A19001, Gamma Globulin)，由(you)165 mg/mL人源IgG、22.5 mg/mL甘氨(an)酸和(he)5mg /mL氯化(hua)鈉(na)組(zu)成，pH值(zhi)為6.8，購(gou)自GC Biopharma(京畿道(dao)(dao)，韓國(guo))。IgG用相同的(de)緩(huan)沖液稀(xi)釋(shi)至(zhi)10 mg/mL, LNP在pH 7.4的(de)緩(huan)沖液中(zhong)稀(xi)釋(shi)40倍。LNP載體(以下簡稱LNP)由(you)脂(zhi)質(zhi)膽固醇、peg2000神經(jing)酰胺、陽離子(zi)脂(zhi)質(zhi)和(he)1,2-二硬脂(zhi)酰- asn -甘油-3-磷(lin)酸膽堿(dsc)組(zu)成，由(you)EnhancedBio Inc.(首爾，韓國(guo))提供。注射(she)用水(WFI)購(gou)自JW制藥公司(si)(韓國(guo)首爾)，異丙醇(IPA)購(gou)自大(da)田(tian)化(hua)學金屬有限公司(si)(韓國(guo)京畿道(dao)(dao))。n - α-乙酰- l-精(jing)氨(an)酸和(he)Tween™20 Surfact-Amps™洗(xi)滌(di)劑溶液(Tween 20)分別購(gou)自Sigma-Aldrich (St. Louis, LO, USA)和(he)Thermo Fisher Scientific (Cleveland, OH, USA)。

比較三種不同品牌的注射器:(1)kovax -注射器1 mL，可拆卸26號針頭(so -注射器1;韓國疫苗有限公司，京畿道，韓國)，(2)b1ml帶Luer-lok™尖端的注射器(so -注射器2;Becton, Dickinson and Company, Franklin Lakes, NJ, USA)和(3)HENKE-JECT^®兩部分一次性注射器1ml不含硅油(SO-free注射器)。所有的注射器都在有效期內使用過。KOVAX-NEEDLE 25G (25G針頭;除了“過濾器針頭測試"外，研究中所有3支注射器都使用了韓國疫苗有限公司(Korea Vaccine Co.，京畿道，Korea京畿道)，該測試使用了胰島素/結核菌素注射器(Ezfilter^®1ml, Donghwa C&M)的(de)可拆(chai)卸18號針頭和5 μm針頭過濾(lv)器。(首爾，韓國(guo))。針頭從原(yuan)來的(de)注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)(she)器中(zhong)分離出來使(shi)用(yong)。對(dui)于(yu)MDV，使(shi)用(yong)高壓滅(mie)菌后(hou)的(de)5ml玻璃小(xiao)瓶(BT134005, Hwankyung Tech, Seoul, Korea)，在重新包裝前用(yong)20mm橡膠塞和鋁壓蓋(gai)將其封(feng)閉。對(dui)于(yu)再(zai)包裝注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)(she)器，8支注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)(she)器從5 mL裝藥的(de)小(xiao)瓶中(zhong)取出0.5 mL (n = 3)，第1、4、7、8支注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)(she)器用(yong)于(yu)顆粒分析。

圖2所示(shi)。(a)研(yan)究中(zhong)使用的(de)(de)代表性塑料注(zhu)射(she)器和針頭，(b)使用WFI和IPA從(cong)每(mei)種類型的(de)(de)20支注(zhu)射(she)器中(zhong)提(ti)取(qu)的(de)(de)干燥殘(can)留物的(de)(de)重量，以(yi)及(c)從(cong)塑料注(zhu)射(she)器中(zhong)提(ti)取(qu)的(de)(de)殘(can)留物的(de)(de)疊加FT-IR光譜。

2.2 衰減全反(fan)射FT-IR光譜

使(shi)用(yong)Nicolet iS5分(fen)(fen)光光度計(Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA)配備iD5鉆石衰減全(quan)反射附件(jian)來鑒定(ding)硅油。在(zai)室溫(wen)下測量(liang)紅(hong)外光譜。為(wei)了從(cong)注射器中提取(qu)(qu)硅油，每(mei)種型號各取(qu)(qu)50支注射器，先充(chong)入0.5 mL的IPA，倒置(zhi)10次(ci)，然(ran)后(hou)將(jiang)內容物釋放到(dao)(dao)50 mL的燒杯中。IPA在(zai)100°C下干燥，直到(dao)(dao)獲得恒定(ding)重(zhong)量(liang)。提取(qu)(qu)物用(yong)100 μL異丙醇重(zhong)溶。將(jiang)制備好的樣品取(qu)(qu)5 μL置(zhi)于結晶板上干燥5min，在(zai)4000 cm??1 ~ 400 cm??1范圍內記錄64幅干涉(she)圖，分(fen)(fen)辨率(lv)為(wei)4 cm??1。采用(yong)Nicolet Omnic軟件(jian)8.2.387對樣品進行光譜分(fen)(fen)析。

2.3 硅油(you)含量(liang)

為了測定(ding)塑(su)料注(zhu)射器中(zhong)硅油(即可浸出的(de))的(de)相(xiang)對(dui)含量，20支注(zhu)射器各充(chong)(chong)入0.5 mL WFI和(he)IPA。填充(chong)(chong)后(hou)，注(zhu)射器用(yong)注(zhu)射器蓋(gai)密封并倒(dao)置(zhi)10次(ci)，然后(hou)將內容物釋放到(dao)預稱重(zhong)的(de)玻(bo)璃小瓶中(zhong)。將小瓶中(zhong)的(de)溶劑(ji)在100℃下完(wan)全干(gan)(gan)燥(zao)，直(zhi)到(dao)獲(huo)得恒定(ding)重(zhong)量，并記錄干(gan)(gan)燥(zao)提取物的(de)重(zhong)量。

2.4 光阻法

使用HIAC 9703+液體粒子計數器(Beckman-Coulter, Brea, CA, USA)獲得顆粒濃度。在每次分析之前，用0.2 μm minusart^®NML無表面活性劑醋酸纖維素注(zhu)射器(qi)過(guo)濾器(qi)(Sartorius AG, Goettingen，德國(guo))過(guo)濾的去(qu)離子(zi)水沖洗(xi)流體路徑，然后(hou)測(ce)量(liang)相同(tong)的顆(ke)粒計(ji)數以(yi)確認檢測(ce)器(qi)的清潔(jie)度(du)。<10個粒子(zi)(p)/mL被認為(wei)(wei)是可接(jie)受的背景值。每個樣品(pin)測(ce)量(liang)5次(ci)，每次(ci)測(ce)量(liang)體積為(wei)(wei)0.1 mL。使用3個結(jie)果(guo)的平(ping)(ping)均值(即刪(shan)除次(ci)和(he)最后(hou)一(yi)次(ci)檢測(ce)的結(jie)果(guo))來計(ji)算平(ping)(ping)均值和(he)標準差。通過(guo)儀器(qi)自帶的PhamSpec軟件(jian)(版(ban)本為(wei)(wei)3.5.32)獲(huo)得粒徑>2 μm、>5 μm、>10 μm和(he)>25 μm的顆(ke)粒。數據依次(ci)排列在2 ~ 10 μm、10 ~ 25 μm和(he)>25 μm的尺寸范圍內(nei)。

2.5 流式成像法

采用配(pei)備10倍(bei)放大(da)鏡的Flowcam 8100 (Fluid-imaging Technologies, ME, USA)對顆粒濃(nong)(nong)度(p/mL)及其形態進行分(fen)析。在每次(ci)樣品測(ce)(ce)量之前，測(ce)(ce)量去離子水以(yi)確認(ren)流體(ti)路徑和流池的清潔度。顆粒濃(nong)(nong)度< 50 p/mL被認(ren)為是(shi)可接受的背景值。在所有的測(ce)(ce)量中(zhong)，使(shi)用未(wei)經稀釋的0.5 mL樣品溶液(ye)，以(yi)避(bi)免(mian)形成(cheng)的顆粒解離(數(shu)據(ju)未(wei)顯示)，0.1 mL的樣品溶液(ye)以(yi)0.1 mL/min的流速測(ce)(ce)量5次(ci)。和第五項分(fen)析從數(shu)據(ju)收集中(zhong)刪除。基于ABD的顆粒粒徑范圍為1 ~ 10 μm、10 ~ 25 μm和>25 μm。通過3個連續測(ce)(ce)量和3個單獨的小瓶計算平均值和標準差。使(shi)用儀(yi)器自帶的VisualSpreadsheet軟件(4.17.14版(ban)本)進行數(shu)據(ju)分(fen)析。

2.6 統計數據(ju)

實驗分三(san)次進行，使用Excel程(cheng)序計算(suan)平均值和(he)標準差。

2.7 統計分析

在Microsoft Excel中使用Student’s t-test比較LO和(he)FI的結(jie)果。每次(ci)分(fen)析(xi)的統計學顯(xian)著性用單尾p值表示，p值分(fen)為(wei)<0.05(*)、<0.01(**)和(he)<0.001(***)三類。所有數據均以(yi)均值和(he)標準差表示(n = 9)。

圖3所示。在WFI上通(tong)過LO(上)和(he)FI(下)進(jin)行(xing)顆(ke)(ke)粒分析，從小瓶中來回移(yi)動重(zhong)(zhong)新(xin)包裝(zhuang)(zhuang)在塑料注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)(she)(she)器(qi)(qi)中。*p < 0.05， **p < 0.01， ***p < 0.001表示重(zhong)(zhong)新(xin)包裝(zhuang)(zhuang)的注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)(she)(she)器(qi)(qi)中顆(ke)(ke)粒濃度與之(zhi)前的注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)(she)(she)器(qi)(qi)相比增(zeng)加有統計學意義(重(zhong)(zhong)新(xin)包裝(zhuang)(zhuang)的注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)(she)(she)器(qi)(qi)#4 >重(zhong)(zhong)新(xin)包裝(zhuang)(zhuang)的注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)(she)(she)器(qi)(qi)#1;重(zhong)(zhong)新(xin)包裝(zhuang)(zhuang)的注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)(she)(she)器(qi)(qi)#7 >重(zhong)(zhong)新(xin)包裝(zhuang)(zhuang)的注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)(she)(she)器(qi)(qi)#4;重(zhong)(zhong)新(xin)包裝(zhuang)(zhuang)注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)(she)(she)器(qi)(qi)#8 >重(zhong)(zhong)新(xin)包裝(zhuang)(zhuang)注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)(she)(she)器(qi)(qi)#7)

三、結果與討論

注射器內硅油含量

圖2a顯示了不(bu)同類(lei)型的(de)(de)(de)含(han)硅油和(he)不(bu)含(han)硅油的(de)(de)(de)注射器(qi)以及實(shi)驗中(zhong)使用(yong)(yong)的(de)(de)(de)針頭。在(zai)之前的(de)(de)(de)研究(jiu)中(zhong)，我們使用(yong)(yong)IPA對(dui)SO注射器(qi)中(zhong)的(de)(de)(de)硅油殘留物(wu)(wu)進行(xing)提取(qu)和(he)定量。由(you)于(yu)大多(duo)數藥物(wu)(wu)配方都是(shi)基于(yu)水(shui)性溶劑(ji)，與IPA一起(qi)，WFI還用(yong)(yong)于(yu)相對(dui)量化塑(su)料(liao)注射器(qi)的(de)(de)(de)可浸出水(shui)平。

圖(tu)(tu)2b顯(xian)示(shi)了(le)使(shi)用IPA和WFI從(cong)每種(zhong)類型的(de)(de)(de)(de)(de)20支注射(she)器(qi)中(zhong)(zhong)(zhong)提(ti)取(qu)(qu)的(de)(de)(de)(de)(de)干燥殘(can)留(liu)(liu)(liu)物(wu)(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)重(zhong)量(liang)。由于溶(rong)解度的(de)(de)(de)(de)(de)差異，ipa提(ti)取(qu)(qu)殘(can)留(liu)(liu)(liu)物(wu)(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)數(shu)量(liang)可(ke)能更高(gao)。如(ru)圖(tu)(tu)所示(shi)，so -注射(she)器(qi)1產生的(de)(de)(de)(de)(de)殘(can)留(liu)(liu)(liu)量(liang)最多(20支注射(she)器(qi)的(de)(de)(de)(de)(de)平(ping)均(jun)(jun)值(zhi):WFI為1.20 mg, IPA為20.66 mg)，其(qi)次(ci)是(shi)so -注射(she)器(qi)2(20支注射(she)器(qi)的(de)(de)(de)(de)(de)平(ping)均(jun)(jun)值(zhi):WFI為0.68 mg, IPA為5.27 mg)，這(zhe)表明(ming)不(bu)同供應商的(de)(de)(de)(de)(de)注射(she)器(qi)中(zhong)(zhong)(zhong)可(ke)浸出水平(ping)差異很大。進一步(bu)用傅里(li)葉變換紅外光(guang)譜(pu)(FT-IR)對(dui)萃取(qu)(qu)物(wu)(wu)(wu)進行分析，以確定殘(can)留(liu)(liu)(liu)物(wu)(wu)(wu)中(zhong)(zhong)(zhong)存在硅(gui)油。如(ru)圖(tu)(tu)2c所示(shi)的(de)(de)(de)(de)(de)FT-IR光(guang)譜(pu)顯(xian)示(shi)，硅(gui)油在1260 cm??1 (CH3在Si-CH3中(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)彎(wan)曲振(zhen)動)、1090 cm??1、1020 cm??1 (Si-O-Si的(de)(de)(de)(de)(de)不(bu)對(dui)稱拉(la)(la)伸振(zhen)動)和800 cm??1 (Si-C在Si-CH3中(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)拉(la)(la)伸振(zhen)動)處有(you)明(ming)顯(xian)的(de)(de)(de)(de)(de)吸收帶[31,32]。此外，FT-IR上的(de)(de)(de)(de)(de)吸光(guang)度與殘(can)留(liu)(liu)(liu)物(wu)(wu)(wu)的(de)(de)(de)(de)(de)數(shu)量(liang)相關，如(ru)圖(tu)(tu)2c所示(shi)，進一步(bu)證實殘(can)留(liu)(liu)(liu)物(wu)(wu)(wu)主要(yao)是(shi)硅(gui)油。有(you)趣的(de)(de)(de)(de)(de)是(shi)，盡管在FT-IR光(guang)譜(pu)中(zhong)(zhong)(zhong)沒有(you)觀察到硅(gui)油相關的(de)(de)(de)(de)(de)峰(feng)，但在無so注射(she)器(qi)中(zhong)(zhong)(zhong)也發(fa)現了(le)少(shao)量(liang)殘(can)留(liu)(liu)(liu)(WFI中(zhong)(zhong)(zhong)平(ping)均(jun)(jun)0.07 mg, IPA中(zhong)(zhong)(zhong)平(ping)均(jun)(jun)0.26 mg)。在這(zhe)種(zhong)情(qing)況下，檢測到酰(xian)胺在3184和3375 cm??1處的(de)(de)(de)(de)(de)N-H拉(la)(la)伸峰(feng)(數(shu)據未顯(xian)示(shi))和在1631和1557 cm??1處的(de)(de)(de)(de)(de)C - - 0拉(la)(la)伸峰(feng)，表明(ming)無so注射(she)器(qi)提(ti)取(qu)(qu)物(wu)(wu)(wu)中(zhong)(zhong)(zhong)使(shi)用的(de)(de)(de)(de)(de)油酰(xian)胺型潤滑劑(ji)存在。

so -注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)器(qi)1和so -注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)器(qi)2的(de)(de)(de)(de)硅油每面積(ji)重量(liang)分(fen)別為0.08 mg/cm2和0.02 mg/cm2，均在(zai)ISO 7886- 1:2017的(de)(de)(de)(de)一般限(xian)值(0.25 mg/cm2)內。相(xiang)比之(zhi)下(xia)，使用(yong)可(ke)(ke)以(yi)完全溶解硅油的(de)(de)(de)(de)乙酸乙酯可(ke)(ke)以(yi)產(chan)生(sheng)更大的(de)(de)(de)(de)量(liang)。然而，我們在(zai)本(ben)研究中(zhong)沒(mei)有(you)使用(yong)有(you)機溶劑，因為它也(ye)會(hui)提取(qu)雙(shuang)酚A，并且會(hui)增加so -注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)器(qi)2中(zhong)提取(qu)物(wu)的(de)(de)(de)(de)重量(liang)。因此(ci)，即使是輕(qing)微的(de)(de)(de)(de)攪拌，如傾斜注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)器(qi)幾(ji)次，也(ye)會(hui)導致硅油從充滿(man)WFI的(de)(de)(de)(de)注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)器(qi)釋放到MDV中(zhong)。我們進行了進一步的(de)(de)(de)(de)研究，以(yi)評估有(you)和沒(mei)有(you)模型(xing)藥物(wu)的(de)(de)(de)(de)SO注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)器(qi)產(chan)生(sheng)的(de)(de)(de)(de)mdv中(zhong)的(de)(de)(de)(de)顆粒積(ji)累程度。

圖(tu)4所(suo)示。10 mg/mL IgG，重(zhong)(zhong)新(xin)(xin)(xin)包(bao)裝在塑料(liao)注(zhu)射器中(zhong)(a)， (b)無來(lai)回運動(dong)。*p < 0.05， **p < 0.01， ***p < 0.001表(biao)示重(zhong)(zhong)新(xin)(xin)(xin)包(bao)裝的(de)注(zhu)射器中(zhong)顆(ke)粒濃度與之前的(de)注(zhu)射器相(xiang)比增加有統計學意義(yi)(重(zhong)(zhong)新(xin)(xin)(xin)包(bao)裝的(de)注(zhu)射器#4 >重(zhong)(zhong)新(xin)(xin)(xin)包(bao)裝的(de)注(zhu)射器#1;重(zhong)(zhong)新(xin)(xin)(xin)包(bao)裝的(de)注(zhu)射器#7 >重(zhong)(zhong)新(xin)(xin)(xin)包(bao)裝的(de)注(zhu)射器#4;重(zhong)(zhong)新(xin)(xin)(xin)包(bao)裝注(zhu)射器#8 >重(zhong)(zhong)新(xin)(xin)(xin)包(bao)裝注(zhu)射器#7)

再包裝注(zhu)射器中WFI的(de)顆粒分(fen)析(xi)

硅油在(zai)注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)內的(de)釋放及其對生物藥(yao)品穩定性和(he)有效性的(de)影(ying)響以及免疫原性風險在(zai)過去20年中(zhong)已經(jing)有報道。如圖1所示，將(jiang)藥(yao)品取出的(de)方法可(ke)能會增(zeng)加污染瓶(ping)中(zhong)剩余(yu)藥(yao)品的(de)風險。這將(jiang)帶(dai)來更大的(de)mdv風險，因為通過每(mei)次注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)制(zhi)備(bei)引入小瓶(ping)的(de)任何顆(ke)粒(li)都可(ke)能被攜帶(dai)到連續的(de)注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)上。為了(le)證實顆(ke)粒(li)數(shu)量隨著注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)制(zhi)備(bei)而增(zeng)加的(de)假(jia)設，最(zui)初進行了(le)預測試，將(jiang)小瓶(ping)中(zhong)的(de)WFI重新包裝到8個帶(dai)硅油和(he)不帶(dai)硅油的(de)注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)中(zhong)。然后(hou)使用(yong)LO和(he)FI評估注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)的(de)顆(ke)粒(li)計數(shu)。

圖(tu)3顯示了用LO和(he)(he)FI測定(ding)的(de)(de)(de)瓶子中(zhong)再包裝(zhuang)注射(she)器(qi)中(zhong)WFI的(de)(de)(de)顆粒(li)(li)濃度(p/mL)。結果(guo)表明，LO和(he)(he)FI的(de)(de)(de)顆粒(li)(li)濃度相差(cha)大于(yu)10倍。這種差(cha)異(yi)已被廣泛報道，并歸因于(yu)LO檢測光(guang)學對(dui)比度低(di)和(he)(he)/或(huo)折射(she)率與介(jie)質相似的(de)(de)(de)顆粒(li)(li)的(de)(de)(de)能力(li)有限。與標準聚苯(ben)乙烯珠(zhu)(折射(she)率為1.6)不(bu)(bu)同，硅(gui)油(you)(1.405)和(he)(he)水(1.333)的(de)(de)(de)折射(she)率差(cha)異(yi)很小，可(ke)能限制了LO對(dui)硅(gui)油(you)顆粒(li)(li)的(de)(de)(de)檢測。然而(er)，LO和(he)(he)FI識別的(de)(de)(de)顆粒(li)(li)尺寸在(zai)1- 25 μm范(fan)圍(wei)內(nei)，在(zai)1-或(huo)2-10 μm范(fan)圍(wei)內(nei)顆粒(li)(li)負(fu)荷較高。這一觀(guan)察結果(guo)與之前的(de)(de)(de)一項(xiang)研(yan)究一致(zhi)，該研(yan)究報告在(zai)2-8?C下(xia)儲(chu)存(cun)90天后，注射(she)器(qi)中(zhong)1-10 μm范(fan)圍(wei)內(nei)產(chan)生了更多(duo)的(de)(de)(de)硅(gui)油(you)顆粒(li)(li)。相應的(de)(de)(de)，LO檢測到(dao)的(de)(de)(de)>25 μm的(de)(de)(de)顆粒(li)(li)數量可(ke)以忽(hu)略不(bu)(bu)計，而(er)FI沒有檢測到(dao)這樣(yang)的(de)(de)(de)顆粒(li)(li)。

圖(tu)3顯(xian)示(shi)了基(ji)于(yu)注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)(qi)(qi)(qi)(qi)類(lei)型的(de)(de)(de)(de)結果評價，可見so -注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)(qi)(qi)(qi)(qi)1的(de)(de)(de)(de)顆(ke)粒(li)(li)(li)計數最高(gao)，其次是so -注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)(qi)(qi)(qi)(qi)2，與各自注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)(qi)(qi)(qi)(qi)中(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)硅油含量相(xiang)當(圖(tu)2b)。在(zai)無(wu)(wu)(wu)so注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)(qi)(qi)(qi)(qi)中(zhong)(zhong)(zhong)也檢(jian)測到(dao)顆(ke)粒(li)(li)(li)，盡(jin)管相(xiang)對較少。圖(tu)2c所(suo)示(shi)的(de)(de)(de)(de)FT-IR數據(ju)得(de)到(dao)了先(xian)前研(yan)究的(de)(de)(de)(de)證實，表明殘(can)留(liu)物可能是從(cong)無(wu)(wu)(wu)so注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)(qi)(qi)(qi)(qi)的(de)(de)(de)(de)內表面釋放出來的(de)(de)(de)(de)油酰胺。此外，從(cong)LO和(he)FI獲得(de)的(de)(de)(de)(de)數據(ju)顯(xian)示(shi)，無(wu)(wu)(wu)論注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)(qi)(qi)(qi)(qi)類(lei)型如(ru)何，隨著(zhu)重新(xin)(xin)包(bao)(bao)(bao)裝(zhuang)(zhuang)計數的(de)(de)(de)(de)增(zeng)加，顆(ke)粒(li)(li)(li)積累的(de)(de)(de)(de)模式相(xiang)似。在(zai)所(suo)有類(lei)型的(de)(de)(de)(de)注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)(qi)(qi)(qi)(qi)中(zhong)(zhong)(zhong)，顆(ke)粒(li)(li)(li)濃(nong)(nong)度隨每次重新(xin)(xin)包(bao)(bao)(bao)裝(zhuang)(zhuang)而增(zeng)加，這支(zhi)持了我(wo)們的(de)(de)(de)(de)假設(she)。最初(chu)，在(zai)1 - 10 μm范圍內，重新(xin)(xin)包(bao)(bao)(bao)裝(zhuang)(zhuang)的(de)(de)(de)(de)so -注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)(qi)(qi)(qi)(qi)1、so -注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)(qi)(qi)(qi)(qi)2和(he)無(wu)(wu)(wu)so -注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)(qi)(qi)(qi)(qi)1中(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)顆(ke)粒(li)(li)(li)濃(nong)(nong)度(即(ji)按FI計算)分別(bie)為1246 p/mL、1038 p/mL和(he)874 p/mL，在(zai)重新(xin)(xin)包(bao)(bao)(bao)裝(zhuang)(zhuang)的(de)(de)(de)(de)注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)(qi)(qi)(qi)(qi)8中(zhong)(zhong)(zhong)分別(bie)增(zeng)加到(dao)9830 p/mL、5744 p/mL和(he)3458 p/mL。結果表明，高(gao)變異(yi)性的(de)(de)(de)(de)管理注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)(qi)(qi)(qi)(qi)和(he)一個令人驚訝(ya)的(de)(de)(de)(de)結果，顆(ke)粒(li)(li)(li)濃(nong)(nong)度的(de)(de)(de)(de)增(zeng)加取(qu)決于(yu)重新(xin)(xin)包(bao)(bao)(bao)裝(zhuang)(zhuang)注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)(qi)(qi)(qi)(qi)的(de)(de)(de)(de)數量。

此外，每次重新包裝(zhuang)時顆粒(li)濃(nong)度(du)的(de)(de)(de)增(zeng)加也提(ti)出了在(zai)(zai)臨床環境中(zhong)通常使用(yong)的(de)(de)(de)提(ti)取技術(來回移(yi)動)的(de)(de)(de)問(wen)題(ti)(圖1)。從(cong)(cong)小瓶中(zhong)提(ti)取藥品(pin)時經(jing)常會(hui)產生氣泡(pao)。在(zai)(zai)步驟(zou)4中(zhong)，輕彈(dan)注(zhu)射(she)器使氣泡(pao)向注(zhu)射(she)器尖(jian)端移(yi)動會(hui)引起(qi)機械(xie)應(ying)(ying)力，從(cong)(cong)而導致(zhi)硅油或其他潤滑劑從(cong)(cong)內(nei)桶中(zhong)遷(qian)移(yi)[16]。此外，推(tui)動柱塞將氣泡(pao)釋放(fang)到(dao)瓶中(zhong)，將釋放(fang)的(de)(de)(de)潤滑劑引入瓶中(zhong)。Melo等人的(de)(de)(de)研究(jiu)報(bao)道，輕彈(dan)注(zhu)射(she)器引起(qi)的(de)(de)(de)SO液滴水平升(sheng)高可(ke)能導致(zhi)眼內(nei)注(zhu)射(she)患(huan)者不(bu)良反應(ying)(ying)增(zeng)加。圖3所(suo)示的(de)(de)(de)結果表明，在(zai)(zai)含潤滑劑注(zhu)射(she)器中(zhong)使用(yong)前(qian)后運動和輕彈(dan)會(hui)導致(zhi)每次重新包裝(zhuang)時MDV中(zhong)的(de)(de)(de)顆粒(li)(可(ke)浸(jin)出)濃(nong)度(du)增(zeng)加，這(zhe)可(ke)能與藥物相互作用(yong)，影響藥物的(de)(de)(de)療效和穩定性。

圖(tu)5所示(shi)。用FI對(dui)10 mg/mL IgG進行顆(ke)粒(li)(li)分析(xi)，重(zhong)(zhong)(zhong)新(xin)包裝(zhuang)在塑料注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)器(qi)中(a)， (b)沒有來回運動。*p < 0.05， **p < 0.01， ***p < 0.001表示(shi)重(zhong)(zhong)(zhong)新(xin)包裝(zhuang)的(de)注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)器(qi)中顆(ke)粒(li)(li)濃度與之(zhi)前的(de)注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)器(qi)相比(bi)增加有統計(ji)學(xue)意義(重(zhong)(zhong)(zhong)新(xin)包裝(zhuang)的(de)注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)器(qi)#4 >重(zhong)(zhong)(zhong)新(xin)包裝(zhuang)的(de)注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)器(qi)#1;重(zhong)(zhong)(zhong)新(xin)包裝(zhuang)的(de)注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)器(qi)#7 >重(zhong)(zhong)(zhong)新(xin)包裝(zhuang)的(de)注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)器(qi)#4;重(zhong)(zhong)(zhong)新(xin)包裝(zhuang)注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)器(qi)#8 >重(zhong)(zhong)(zhong)新(xin)包裝(zhuang)注(zhu)(zhu)(zhu)射(she)器(qi)#7)

再包(bao)裝注射(she)器中(zhong)藥物顆粒分析:前后運動的影響

我們以(yi)10 mg/mL IgG為模型藥物，考察(cha)(cha)硅(gui)(gui)油(you)和(he)(he)來(lai)回法對(dui)蛋(dan)(dan)白(bai)治療(liao)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)影響(xiang)。圖4和(he)(he)圖5分別顯(xian)示了(le)(le)使用LO和(he)(he)FI分析(xi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)再包(bao)裝注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)(qi)(qi)(qi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)顆(ke)(ke)粒分析(xi)。當在(zai)小(xiao)瓶中(zhong)(zhong)(zhong)存(cun)在(zai)IgG的(de)(de)(de)(de)(de)(de)情(qing)(qing)況下進行前(qian)后移動時(shi)，與(yu)WFI相比，在(zai)所(suo)有尺寸范圍內(nei)都(dou)觀察(cha)(cha)到顆(ke)(ke)粒濃度(du)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)顯(xian)著(zhu)增(zeng)(zeng)(zeng)加(jia)。在(zai)2個(ge)品(pin)牌的(de)(de)(de)(de)(de)(de)SO注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)(qi)(qi)(qi)中(zhong)(zhong)(zhong)，每次重(zhong)新(xin)(xin)包(bao)裝都(dou)有明顯(xian)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)增(zeng)(zeng)(zeng)加(jia)趨勢，表(biao)(biao)(biao)明所(suo)產(chan)生的(de)(de)(de)(de)(de)(de)微(wei)粒的(de)(de)(de)(de)(de)(de)積累和(he)(he)轉移。與(yu)WFI樣品(pin)(圖3)相比，重(zhong)新(xin)(xin)包(bao)裝的(de)(de)(de)(de)(de)(de)注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)(qi)(qi)(qi)#8中(zhong)(zhong)(zhong)，so -注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)(qi)(qi)(qi)1、so -注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)(qi)(qi)(qi)2和(he)(he)無(wu)so -注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)(qi)(qi)(qi)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)顆(ke)(ke)粒計數分別比LO觀察(cha)(cha)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)增(zeng)(zeng)(zeng)加(jia)了(le)(le)5倍(bei)(bei)(bei)、6倍(bei)(bei)(bei)和(he)(he)3倍(bei)(bei)(bei)(圖4a)，比FI觀察(cha)(cha)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)增(zeng)(zeng)(zeng)加(jia)了(le)(le)11倍(bei)(bei)(bei)、4倍(bei)(bei)(bei)和(he)(he)3倍(bei)(bei)(bei)(圖5a)。結(jie)果表(biao)(biao)(biao)明，與(yu)不(bu)使用SO的(de)(de)(de)(de)(de)(de)注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)(qi)(qi)(qi)相比，使用SO的(de)(de)(de)(de)(de)(de)注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)(qi)(qi)(qi)顆(ke)(ke)粒濃度(du)增(zeng)(zeng)(zeng)加(jia)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)傾(qing)向更(geng)高，表(biao)(biao)(biao)明硅(gui)(gui)油(you)是(shi)(shi)顆(ke)(ke)粒形(xing)成(cheng)(cheng)(cheng)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)原因。此(ci)外，還觀察(cha)(cha)了(le)(le)不(bu)同品(pin)牌SO注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)(qi)(qi)(qi)顆(ke)(ke)粒濃度(du)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)差(cha)異。造成(cheng)(cheng)(cheng)差(cha)異的(de)(de)(de)(de)(de)(de)原因可(ke)以(yi)解(jie)(jie)釋(shi)為從(cong)注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)(qi)(qi)(qi)中(zhong)(zhong)(zhong)釋(shi)放的(de)(de)(de)(de)(de)(de)硅(gui)(gui)油(you)量(liang)不(bu)同(圖2b)，可(ke)能(neng)在(zai)使用so -注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)(qi)(qi)(qi)1時(shi)提(ti)供了(le)(le)更(geng)多的(de)(de)(de)(de)(de)(de)形(xing)成(cheng)(cheng)(cheng)蛋(dan)(dan)白(bai)膜和(he)(he)顆(ke)(ke)粒的(de)(de)(de)(de)(de)(de)位點(圖3、4a和(he)(he)5a)。然而(er)，無(wu)論(lun)不(bu)同品(pin)牌，兩種SO注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)(qi)(qi)(qi)均存(cun)在(zai)>25 μm的(de)(de)(de)(de)(de)(de)顆(ke)(ke)粒，而(er)在(zai)WFI中(zhong)(zhong)(zhong)，這一(yi)差(cha)異不(bu)顯(xian)著(zhu)。顆(ke)(ke)粒的(de)(de)(de)(de)(de)(de)代(dai)表(biao)(biao)(biao)性FI圖像顯(xian)示，在(zai)IgG存(cun)在(zai)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)情(qing)(qing)況下，硅(gui)(gui)油(you)與(yu)吸附(fu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)蛋(dan)(dan)白(bai)質(zhi)(zhi)形(xing)成(cheng)(cheng)(cheng)了(le)(le)一(yi)個(ge)復合物，形(xing)成(cheng)(cheng)(cheng)了(le)(le)尺寸>25 μm的(de)(de)(de)(de)(de)(de)更(geng)大(da)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)亞可(ke)見(jian)顆(ke)(ke)粒(圖6)。此(ci)外，藥物介質(zhi)(zhi)對(dui)過程中(zhong)(zhong)(zhong)微(wei)粒的(de)(de)(de)(de)(de)(de)形(xing)成(cheng)(cheng)(cheng)也有顯(xian)著(zhu)影響(xiang)。甘(gan)氨酸在(zai)本(ben)研(yan)究中(zhong)(zhong)(zhong)作為IgG的(de)(de)(de)(de)(de)(de)賦形(xing)劑(ji)，通過減少界(jie)面吸附(fu)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)有效性來(lai)增(zeng)(zeng)(zeng)加(jia)蛋(dan)(dan)白(bai)質(zhi)(zhi)分子(zi)展開的(de)(de)(de)(de)(de)(de)能(neng)量(liang)，這可(ke)能(neng)是(shi)(shi)在(zai)SO存(cun)在(zai)下形(xing)成(cheng)(cheng)(cheng)微(wei)粒的(de)(de)(de)(de)(de)(de)主(zhu)要途徑，使蛋(dan)(dan)白(bai)質(zhi)(zhi)分子(zi)容易(yi)被吸附(fu)到SO表(biao)(biao)(biao)面。先前(qian)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)研(yan)究表(biao)(biao)(biao)明，在(zai)注(zhu)(zhu)射(she)筒(tong)處的(de)(de)(de)(de)(de)(de)硅(gui)(gui)油(you)表(biao)(biao)(biao)面可(ke)以(yi)形(xing)成(cheng)(cheng)(cheng)蛋(dan)(dan)白(bai)質(zhi)(zhi)層。初(chu)級層是(shi)(shi)不(bu)可(ke)逆結(jie)合，而(er)隨(sui)后的(de)(de)(de)(de)(de)(de)層是(shi)(shi)可(ke)逆結(jie)合，并(bing)且(qie)容易(yi)被柱(zhu)塞(sai)頭的(de)(de)(de)(de)(de)(de)掃力(li)(li)解(jie)(jie)吸，釋(shi)放微(wei)粒。此(ci)外，幾項攪拌研(yan)究表(biao)(biao)(biao)明，硅(gui)(gui)油(you)顆(ke)(ke)粒從(cong)注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)(qi)(qi)(qi)筒(tong)中(zhong)(zhong)(zhong)釋(shi)放出來(lai)，為其表(biao)(biao)(biao)面形(xing)成(cheng)(cheng)(cheng)蛋(dan)(dan)白(bai)質(zhi)(zhi)膜提(ti)供了(le)(le)一(yi)個(ge)表(biao)(biao)(biao)面，并(bing)增(zeng)(zeng)(zeng)加(jia)了(le)(le)顆(ke)(ke)粒濃度(du)。將注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)(qi)(qi)(qi)鍍硅(gui)(gui)主(zhu)要是(shi)(shi)為了(le)(le)減小(xiao)柱(zhu)塞(sai)與(yu)筒(tong)體內(nei)表(biao)(biao)(biao)面之間(jian)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)滑(hua)動力(li)(li)。由于硅(gui)(gui)油(you)已被證明會增(zeng)(zeng)(zeng)加(jia)注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)(qi)(qi)(qi)中(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)微(wei)粒濃度(du)，具有等(deng)效斷(duan)裂損失和(he)(he)滑(hua)動力(li)(li)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)非硅(gui)(gui)化材料可(ke)能(neng)是(shi)(shi)緩解(jie)(jie)此(ci)類問題的(de)(de)(de)(de)(de)(de)替代(dai)品(pin)。

雖(sui)然用不(bu)含SO的(de)(de)(de)注(zhu)射(she)(she)器(qi)(qi)(qi)代替SO注(zhu)射(she)(she)器(qi)(qi)(qi)減少(shao)了(le)顆(ke)粒(li)(li)負荷，但顆(ke)粒(li)(li)仍在生成，并且顆(ke)粒(li)(li)濃度(du)隨著重(zhong)(zhong)新包裝的(de)(de)(de)增加(jia)而增加(jia)的(de)(de)(de)趨(qu)勢持續存在，這意味著它們與高蛋白濃度(du)的(de)(de)(de)產品不(bu)相容(rong)。進行(xing)了(le)進一(yi)步(bu)的(de)(de)(de)調(diao)查，以(yi)確定不(bu)同的(de)(de)(de)提取(qu)技術(shu)是否(fou)可以(yi)防止不(bu)可見顆(ke)粒(li)(li)的(de)(de)(de)積累和(he)攜帶(dai)到(dao)連續的(de)(de)(de)注(zhu)射(she)(she)器(qi)(qi)(qi)中(zhong)。在步(bu)驟(zou)4(圖(tu)1)中(zhong)輕彈注(zhu)射(she)(she)器(qi)(qi)(qi)使(shi)氣泡(pao)移動(dong)到(dao)噴嘴頂部(bu)后(hou)，注(zhu)射(she)(she)器(qi)(qi)(qi)從小(xiao)瓶(ping)中(zhong)取(qu)出(chu)。然后(hou)，當推動(dong)柱塞時，氣泡(pao)被釋放到(dao)空氣中(zhong)，直到(dao)藥物(wu)溶(rong)液暴露在針頭(tou)的(de)(de)(de)末端。然后(hou)將注(zhu)射(she)(she)器(qi)(qi)(qi)插入小(xiao)瓶(ping)中(zhong)以(yi)調(diao)整所需的(de)(de)(de)藥物(wu)溶(rong)液體積。因此(ci)，在重(zhong)(zhong)新包裝的(de)(de)(de)注(zhu)射(she)(she)器(qi)(qi)(qi)#8中(zhong)，觀察(cha)到(dao)顆(ke)粒(li)(li)計數顯著減少(shao)，分(fen)別由LO和(he)FI檢(jian)測到(dao)約(yue)2至4倍(bei)(bei)減少(shao)(圖(tu)4b)和(he)4至20倍(bei)(bei)減少(shao)(圖(tu)5b)。此(ci)外，當改變前后(hou)運動(dong)(圖(tu)4b)時，重(zhong)(zhong)新包裝的(de)(de)(de)注(zhu)射(she)(she)器(qi)(qi)(qi)#8與無so注(zhu)射(she)(she)器(qi)(qi)(qi)(圖(tu)4a)之間(jian)的(de)(de)(de)顆(ke)粒(li)(li)濃度(du)差異(幾乎是10倍(bei)(bei))最(zui)小(xiao)(圖(tu)4a)。這一(yi)結果突出(chu)了(le)指(zhi)南中(zhong)提供(gong)的(de)(de)(de)提取(qu)技術(shu)和(he)防止硅(gui)油顆(ke)粒(li)(li)積聚方法的(de)(de)(de)缺點。

圖6所示。在10 mg/mL IgG中(zhong)觀察到的(de)顆(ke)粒的(de)代表性FI圖像，重新包裝在含有(you)SO的(de)塑料注射器中(zhong)(右)，沒(mei)有(you)來回運動(dong)(左)

此(ci)(ci)前已有(you)研(yan)究(jiu)報道硅油對(dui)蛋白質(zhi)穩(wen)定性的(de)(de)(de)影響。然而(er)，其在用于(yu)(yu)核酸藥(yao)物遞(di)送的(de)(de)(de)LNP制劑中的(de)(de)(de)作用尚未研(yan)究(jiu)。考慮到最近LNP配(pei)方的(de)(de)(de)流行以及(ji)MDVs用于(yu)(yu)Covid-19疫苗(miao)，研(yan)究(jiu)藥(yao)物穩(wen)定性的(de)(de)(de)各個方面對(dui)于(yu)(yu)確(que)保患者安全(quan)給藥(yao)至關重要(yao)。在LNP上使用相同的(de)(de)(de)程序重復測試(shi)。然而(er)，由于(yu)(yu)FI結果(guo)似乎比LO更敏(min)感，因此(ci)(ci)僅包括FI數(shu)據以供進(jin)一(yi)步討論。圖(tu)7a和b顯(xian)示(shi)了使用FI分(fen)析(xi)的(de)(de)(de)重新包裝LNP的(de)(de)(de)顆粒(li)濃度(du)。在連(lian)續重新包裝的(de)(de)(de)注射器中，顆粒(li)濃度(du)隨前后運(yun)(yun)動呈增加(jia)趨(qu)勢(shi)(圖(tu)7a)。當避免(mian)前后運(yun)(yun)動(圖(tu)7b)時，顆粒(li)計數(shu)沒(mei)有(you)明顯(xian)增加(jia)，不(bu)同類型注射器之間(jian)的(de)(de)(de)差異較小。

與硅(gui)(gui)油(you)誘導的(de)(de)(de)IgG顆粒(li)(li)積(ji)聚(ju)不(bu)同，在(zai)LNPs的(de)(de)(de)代表(biao)性(xing)FI圖(tu)像中區(qu)分硅(gui)(gui)油(you)顆粒(li)(li)是具有(you)挑戰性(xing)的(de)(de)(de)(圖(tu)8)。通常，硅(gui)(gui)油(you)顆粒(li)(li)是根據其圓(yuan)形和中空度(du)與其他顆粒(li)(li)進(jin)行(xing)光(guang)學區(qu)分的(de)(de)(de);硅(gui)(gui)油(you)誘導顆粒(li)(li)的(de)(de)(de)核心更(geng)(geng)亮，核心和邊緣之間的(de)(de)(de)對(dui)比度(du)也很高。然而，LNP樣(yang)品中的(de)(de)(de)此類顆粒(li)(li)很少(圖(tu)8)。這可(ke)以(yi)推測，因(yin)為(wei)LNP與SO相互作用或團(tuan)聚(ju)產生了比蛋白質(zhi)顆粒(li)(li)更(geng)(geng)致(zhi)密(mi)、折射(she)率更(geng)(geng)高的(de)(de)(de)顆粒(li)(li)。我(wo)們沒有(you)進(jin)行(xing)進(jin)一步的(de)(de)(de)表(biao)征(zheng)，因(yin)為(wei)目前的(de)(de)(de)研究(jiu)旨在(zai)證明(ming)在(zai)給藥前，重(zhong)新(xin)包裝的(de)(de)(de)標簽外使(shi)用SO注射(she)器與多用途小瓶中的(de)(de)(de)藥物質(zhi)量不(bu)同。同樣(yang)，在(zai)重(zhong)新(xin)包裝過程中盡量減(jian)少來回運(yun)動可(ke)以(yi)減(jian)少小瓶中的(de)(de)(de)顆粒(li)(li)積(ji)聚(ju)并攜帶到(dao)注射(she)器中。

圖9所示。用FI對(a) 10mg /mL IgG進行顆粒分析，用過濾器集成針重新包裝在塑料注射器中(注射器中未使用過濾針的數據見圖3)，(b) 10mg /mL IgG加入添加劑后重新包裝在塑料注射器中，(c) LNP加入添加劑后重新包裝在塑料注射器中。所有樣品都被重新包裝，前后移動。*p < 0.05， **p < 0.01， ***p < 0.001表示帶濾芯針與不帶添加劑樣品的差異有統計學意義

過濾器(qi)集成針在重(zhong)新(xin)包(bao)裝中的(de)影響

美國衛生系(xi)統協(xie)會建議(yi)在(zai)(zai)(zai)使(shi)(shi)用(yong)(yong)(yong)單(dan)劑(ji)量(liang)(liang)安瓿(bu)時(shi)使(shi)(shi)用(yong)(yong)(yong)5 μm過(guo)濾(lv)(lv)(lv)(lv)器(qi)(qi)(qi)集成(cheng)(cheng)針頭(tou)(tou)，以(yi)降(jiang)低將玻璃顆(ke)(ke)(ke)粒(li)(li)(li)注射(she)(she)到患者體內的(de)(de)風險。一(yi)些研究表(biao)明(ming)，集成(cheng)(cheng)過(guo)濾(lv)(lv)(lv)(lv)器(qi)(qi)(qi)的(de)(de)針頭(tou)(tou)可(ke)(ke)(ke)以(yi)有效(xiao)地減(jian)少玻璃顆(ke)(ke)(ke)粒(li)(li)(li)污染(ran)。在(zai)(zai)(zai)線過(guo)濾(lv)(lv)(lv)(lv)器(qi)(qi)(qi)也被用(yong)(yong)(yong)于(yu)(yu)靜脈輸(shu)液，以(yi)防止微(wei)顆(ke)(ke)(ke)粒(li)(li)(li)成(cheng)(cheng)分(fen)(fen)進入血(xue)液循(xun)環[59]。在(zai)(zai)(zai)之(zhi)前的(de)(de)一(yi)項(xiang)研究中(zhong)(zhong)，與不使(shi)(shi)用(yong)(yong)(yong)過(guo)濾(lv)(lv)(lv)(lv)器(qi)(qi)(qi)的(de)(de)針頭(tou)(tou)與SO注射(she)(she)器(qi)(qi)(qi)一(yi)起(qi)使(shi)(shi)用(yong)(yong)(yong)相比，使(shi)(shi)用(yong)(yong)(yong)過(guo)濾(lv)(lv)(lv)(lv)器(qi)(qi)(qi)集成(cheng)(cheng)針頭(tou)(tou)可(ke)(ke)(ke)以(yi)降(jiang)低IgG制劑(ji)中(zhong)(zhong)的(de)(de)顆(ke)(ke)(ke)粒(li)(li)(li)濃(nong)度(du)。在(zai)(zai)(zai)此基礎上，評(ping)價了5 μm過(guo)濾(lv)(lv)(lv)(lv)集成(cheng)(cheng)針對含IgG的(de)(de)mdv再(zai)包(bao)裝(zhuang)的(de)(de)效(xiao)果。使(shi)(shi)用(yong)(yong)(yong)過(guo)濾(lv)(lv)(lv)(lv)器(qi)(qi)(qi)集成(cheng)(cheng)針降(jiang)低了所有粒(li)(li)(li)徑范圍內的(de)(de)顆(ke)(ke)(ke)粒(li)(li)(li)濃(nong)度(du)(圖9a)。使(shi)(shi)用(yong)(yong)(yong)FI測定，重新包(bao)裝(zhuang)的(de)(de)注射(she)(she)器(qi)(qi)(qi)#8中(zhong)(zhong)粒(li)(li)(li)徑為1 - 10 μm的(de)(de)顆(ke)(ke)(ke)粒(li)(li)(li)數(shu)量(liang)(liang)在(zai)(zai)(zai)so -注射(she)(she)器(qi)(qi)(qi)1中(zhong)(zhong)從111,414 p/mL減(jian)少到95,614 p/mL，在(zai)(zai)(zai)so -注射(she)(she)器(qi)(qi)(qi)2中(zhong)(zhong)從23,238 p/mL減(jian)少到15,524 p/mL。在(zai)(zai)(zai)粒(li)(li)(li)徑> 10 μm范圍內，使(shi)(shi)用(yong)(yong)(yong)該(gai)過(guo)濾(lv)(lv)(lv)(lv)器(qi)(qi)(qi)可(ke)(ke)(ke)降(jiang)低顆(ke)(ke)(ke)粒(li)(li)(li)濃(nong)度(du)。但粒(li)(li)(li)徑>5 μm的(de)(de)顆(ke)(ke)(ke)粒(li)(li)(li)仍存在(zai)(zai)(zai)，且其數(shu)量(liang)(liang)高(gao)于(yu)(yu)消除前后(hou)運動后(hou)的(de)(de)顆(ke)(ke)(ke)粒(li)(li)(li)。這可(ke)(ke)(ke)能(neng)是由于(yu)(yu)硅油和/或誘導顆(ke)(ke)(ke)粒(li)(li)(li)的(de)(de)靈活性，可(ke)(ke)(ke)以(yi)通(tong)過(guo)過(guo)濾(lv)(lv)(lv)(lv)膜;此外，在(zai)(zai)(zai)分(fen)(fen)析之(zhi)前沒(mei)有更(geng)換過(guo)濾(lv)(lv)(lv)(lv)器(qi)(qi)(qi)。然而，數(shu)據表(biao)明(ming)，過(guo)濾(lv)(lv)(lv)(lv)器(qi)(qi)(qi)集成(cheng)(cheng)針頭(tou)(tou)可(ke)(ke)(ke)以(yi)通(tong)過(guo)減(jian)少小瓶中(zhong)(zhong)的(de)(de)積(ji)聚來降(jiang)低攜帶到連續(xu)注射(she)(she)器(qi)(qi)(qi)中(zhong)(zhong)的(de)(de)微(wei)粒(li)(li)(li)水平，特別是在(zai)(zai)(zai)so注射(she)(she)器(qi)(qi)(qi)2中(zhong)(zhong)。

吐(tu)溫20和乙酰精氨酸對再包裝的影(ying)響

已知非離子表(biao)面(mian)(mian)(mian)活性(xing)劑(ji)，如聚(ju)山梨酯，可以降低(di)單克隆抗(kang)體的(de)界面(mian)(mian)(mian)應力(li)，從而最大(da)限(xian)度(du)地減(jian)少硅(gui)油(you)存(cun)在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)下的(de)顆粒(li)(li)形(xing)成(cheng)。表(biao)面(mian)(mian)(mian)活性(xing)劑(ji)濃度(du)大(da)于其臨界膠(jiao)束濃度(du)(CMC)已被(bei)證明(ming)在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)將蛋白質分(fen)子從界面(mian)(mian)(mian)上取代方面(mian)(mian)(mian)特(te)別有效[62]。然而，SO的(de)存(cun)在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)進一步增加了(le)蛋白質吸附(fu)的(de)界面(mian)(mian)(mian)面(mian)(mian)(mian)積(ji)，因此需要使用更多的(de)表(biao)面(mian)(mian)(mian)活性(xing)劑(ji)來減(jian)少界面(mian)(mian)(mian)吸附(fu)。此外，150 mM的(de)n - α-乙(yi)酰- l-精(jing)(jing)(jing)氨(an)酸(suan)(suan)(acetyl- l-arginine，乙(yi)酰精(jing)(jing)(jing)氨(an)酸(suan)(suan))被(bei)報(bao)道(dao)在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)硅(gui)油(you)存(cun)在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)下抑制攪拌應力(li)中(zhong)IgG的(de)亞可見顆粒(li)(li)形(xing)成(cheng)。因此，在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)本研究中(zhong)，在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)IgG和(he)LNP中(zhong)加入10× 20和(he)150 mM乙(yi)酰精(jing)(jing)(jing)氨(an)酸(suan)(suan)cmc，比較它們在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)重(zhong)新(xin)包裝(zhuang)到SO注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)時減(jian)少顆粒(li)(li)形(xing)成(cheng)的(de)效果。當添加到IgG中(zhong)時，Tween 20和(he)乙(yi)酰精(jing)(jing)(jing)氨(an)酸(suan)(suan)在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)所有尺(chi)寸范圍內的(de)顆粒(li)(li)濃度(du)都有所降低(di)(圖4a和(he)5a與圖9b相(xiang)比)。在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)SO注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)1中(zhong)，與重(zhong)新(xin)包裝(zhuang)的(de)注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)7相(xiang)比，顆粒(li)(li)濃度(du)的(de)降低(di)是(shi)顯著的(de)，這表(biao)明(ming)在(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)(zai)注(zhu)(zhu)射(she)器(qi)制備過程中(zhong)，浸出硅(gui)油(you)表(biao)面(mian)(mian)(mian)的(de)蛋白質膜形(xing)成(cheng)受到抑制。

相比(bi)之下，LO和FI結(jie)果(guo)表明(ming)，添(tian)加Tween 20后，1-10 μm的(de)(de)(de)(de)(de)(de)IgG顆(ke)粒(li)(li)數量(liang)相對(dui)較多(duo)。大多(duo)數與(yu)(yu)(yu)硅(gui)油相關的(de)(de)(de)(de)(de)(de)顆(ke)粒(li)(li)(在WFI中)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)大小在1-10 μm之間(圖(tu)2)。考(kao)(kao)慮(lv)到Tween 20由于其高濃度會影響(xiang)IgG的(de)(de)(de)(de)(de)(de)高階結(jie)構，它可(ke)能導(dao)致IgG的(de)(de)(de)(de)(de)(de)Fab區發生(sheng)化學位移，而(er)乙酰精(jing)氨(an)(an)酸(suan)對(dui)其構象的(de)(de)(de)(de)(de)(de)影響(xiang)最小，只是阻止疏水相互作(zuo)(zuo)用，導(dao)致蛋白(bai)質-蛋白(bai)質相互作(zuo)(zuo)用減少(shao)(shao)。然(ran)而(er)，與(yu)(yu)(yu)乙酰精(jing)氨(an)(an)酸(suan)相比(bi)，Tween 20在> 10 μm的(de)(de)(de)(de)(de)(de)尺(chi)寸范圍(wei)內產(chan)生(sheng)了更(geng)好的(de)(de)(de)(de)(de)(de)顆(ke)粒(li)(li)還原效(xiao)果(guo)，這表明(ming)Tween 20對(dui)空氣-水或(huo)其他界面應力的(de)(de)(de)(de)(de)(de)主要影響(xiang)，減少(shao)(shao)了更(geng)大顆(ke)粒(li)(li)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)形成。總體而(er)言，與(yu)(yu)(yu)使用過(guo)濾器(qi)集成針頭相比(bi)，使用添(tian)加劑(ji)對(dui)重新包裝注(zhu)射(she)器(qi)中硅(gui)油誘導(dao)顆(ke)粒(li)(li)的(de)(de)(de)(de)(de)(de)減少(shao)(shao)效(xiao)果(guo)更(geng)好(圖(tu)9a與(yu)(yu)(yu)圖(tu)9b)。同樣，在重新包裝LNP時，Tween 20和乙酰精(jing)氨(an)(an)酸(suan)也能有效(xiao)地減少(shao)(shao)所有尺(chi)寸范圍(wei)內的(de)(de)(de)(de)(de)(de)顆(ke)粒(li)(li)(圖(tu)9c)。因此，在將藥(yao)物投放市場之前，還應考(kao)(kao)慮(lv)最大限(xian)度地減少(shao)(shao)超說(shuo)明(ming)書使用注(zhu)射(she)器(qi)中的(de)(de)(de)(de)(de)(de)顆(ke)粒(li)(li)形成，并需要優(you)化制(zhi)備(bei)指(zhi)南，以確(que)保給藥(yao)前的(de)(de)(de)(de)(de)(de)藥(yao)物質量(liang)。

本研究(jiu)旨在(zai)評估(gu)so注射器(qi)(qi)重復使(shi)(shi)用(yong)(yong)MDV時顆粒(li)(li)蓄積量。WFI、人源(yuan)IgG和(he)(he)LNP三(san)種溶液(ye)的(de)(de)(de)(de)顆粒(li)(li)水平均升(sheng)高，尤(you)其(qi)(qi)高于(yu)無so的(de)(de)(de)(de)注射器(qi)(qi)。其(qi)(qi)濃(nong)度(du)和(he)(he)大小可能(neng)因生(sheng)物藥(yao)品(pin)及其(qi)(qi)制劑的(de)(de)(de)(de)物理特(te)性而異。考慮到(dao)wfi填充(chong)的(de)(de)(de)(de)MDV中顆粒(li)(li)濃(nong)度(du)呈(cheng)持續(xu)增加的(de)(de)(de)(de)趨勢(圖3)，硅(gui)油(you)或微粒(li)(li)的(de)(de)(de)(de)積累會(hui)對下一(yi)次重新包裝的(de)(de)(de)(de)注射器(qi)(qi)產生(sheng)影響。另一(yi)方面，本研究(jiu)的(de)(de)(de)(de)局限性在(zai)于(yu)只(zhi)使(shi)(shi)用(yong)(yong)了LNP載體(ti)。因此(ci)，由(you)于(yu)LNP與塑料注射器(qi)(qi)中硅(gui)油(you)的(de)(de)(de)(de)相互作用(yong)(yong)可能(neng)與COVID-19疫(yi)苗(miao)等商業產品(pin)不同(tong)，因此(ci)沒(mei)有進一(yi)步表征LNP與硅(gui)油(you)的(de)(de)(de)(de)相互作用(yong)(yong)。然而，硅(gui)油(you)在(zai)MDV中積累的(de)(de)(de)(de)影響絕不能(neng)被(bei)低估(gu)，例(li)如，在(zai)使(shi)(shi)用(yong)(yong)低死區(qu)注射器(qi)(qi)(LDS)時，通過清除(chu)小瓶中的(de)(de)(de)(de)殘留物來提供額外(wai)的(de)(de)(de)(de)劑量。

結論

本研究表明，每次連續注(zhu)射(she)器(qi)從(cong)多(duo)用途(tu)小瓶(ping)(ping)中(zhong)提(ti)取硅油誘導的(de)(de)亞可見顆粒增加。改(gai)變停藥技(ji)術減少(shao)了微顆粒的(de)(de)數量，提(ti)示(shi)有必(bi)要修改(gai)制備指南(nan)。此外，使(shi)用過(guo)濾器(qi)集成針或穩定劑也(ye)減少(shao)了顆粒的(de)(de)形成。顆粒濃度可能與(yu)市場上(shang)的(de)(de)“真正"藥品不(bu)同。然而，考慮(lv)到在生(sheng)物制藥中(zhong)越(yue)來越(yue)多(duo)地(di)使(shi)用耐多(duo)藥，認(ren)識到與(yu)亞可見顆粒的(de)(de)產生(sheng)及(ji)其(qi)在小瓶(ping)(ping)中(zhong)的(de)(de)積累有關(guan)的(de)(de)風(feng)險以及(ji)所使(shi)用的(de)(de)材(cai)料(liao)類型和技(ji)術的(de)(de)影響至關(guan)重要。