2023-08-30
摘要：
本品為(wei)未知(zhi)(zhi)含(han)(han)(han)量及種類的氨(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)配制而成的透明(ming)膠質(zhi)類物質(zhi)，使(shi)用(yong)Biochrom30+全自(zi)動(dong)氨(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)分析儀，對其所含(han)(han)(han)的游離氨(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)組分及含(han)(han)(han)量進行分析。結果表明(ming)該未知(zhi)(zhi)樣中氨(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)各單個(ge)氨(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)含(han)(han)(han)量的濃度見附頁結果表。其中樣AE01氨(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)總(zong)含(han)(han)(han)量為(wei)31.969 umol/mL，AE03氨(an)基(ji)(ji)酸(suan)(suan)(suan)總(zong)含(han)(han)(han)量為(wei)36.790 umol/mL。
一、樣品前處理
1、所用試劑
1.1 Loading Buffer：鈉鹽系(xi)統，pH 2.2
1.2 濃鹽酸，濃度≥36%,優級純(chun)
1.3 6mol/L 鹽酸(suan)：取500mL 鹽酸(suan)加水稀釋至(zhi)1000mL,混勻
1.4 水：去離子水
1.5 17種(zhong)氨基酸標(biao)準品
2、前處理設備
1) 分析天平:精度為 0.0001g
2) 移液槍及槍頭
3) 一(yi)次(ci)性注射器及0.22um濾膜
4) 低范圍pH試紙
5) 真空干燥烘箱
6) 無油真空泵
7) 電熱(re)平板及稱量瓶(ping)
3、樣品制備（參考shipinzhongAAS的測定）
移液(ye)槍準確移取試樣1mL，加(jia)入(ru)水(shui)(shui)解(jie)管(guan)(guan)中(zhong)，加(jia)入(ru)10mL 6mol/L鹽酸(1.3)，冷凍3min?5min,接(jie)到真(zhen)空泵的抽氣(qi)管(guan)(guan)上(shang),抽真(zhen)空(接(jie)近0Pa),然后(hou)充(chong)(chong)入(ru)氮(dan)氣(qi),重復抽真(zhen)空-充(chong)(chong)入(ru)氮(dan)氣(qi)步(bu)驟(zou)3次后(hou),在充(chong)(chong)氮(dan)氣(qi)狀(zhuang)態下擰緊(jin)螺蓋(gai)。將水(shui)(shui)解(jie)管(guan)(guan)放入(ru)真(zhen)空干(gan)(gan)燥箱中(zhong)，110°C水(shui)(shui)解(jie)22-24h，冷卻(que)、混(hun)勻(yun)、開管(guan)(guan)、轉移并定容到50ml容量(liang)(liang)瓶(ping)中(zhong)，用移液(ye)槍取適量(liang)(liang)水(shui)(shui)解(jie)液(ye)于稱(cheng)量(liang)(liang)瓶(ping)中(zhong)，在電熱平板上(shang)60℃濃縮至干(gan)(gan)，必要時加(jia)入(ru)少許(xu)水(shui)(shui)(1.4)，重復蒸干(gan)(gan)1-2次，加(jia)入(ru)適量(liang)(liang)PH2.2的稀釋(shi)上(shang)機用檸檬酸鈉緩(huan)沖液(ye)溶解(jie)(1.1),振(zhen)蕩混(hun)勻(yun)后(hou),吸取溶液(ye)通過0.22 μm 濾膜后(hou),轉移至進樣瓶(ping),為樣品測定液(ye),供儀(yi)器(qi)測定用。
二、分析方法描述（Biochrom 30+）
氨基酸分析儀分析方法參數：
1) 色譜柱：Biochrom Na型陽離(li)子交換(huan)樹脂柱，4.6′20cm
2) 分離程序：
運(yun)行時間(jian)：經分(fen)析時間(jian)+再生時間(jian) 59.35min
3) 反應單元溫度(du)：135°C
4) 檢測(ce)波長：570nm、440nm同時檢測(ce)
三、樣(yang)品中(zhong)氨基(ji)酸含量的計算
樣品測定液氨基酸的含量按式(1)計算：
Ci = Cs/As × Ai× F ··········(1)式(shi)中:
Ci ——樣品測定液氨基酸i的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL);
Cs ——氨基酸標準工作液氨基酸s的(de)含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL);
Ai ——試樣測定液氨基(ji)酸i的(de)峰(feng)面積;
As ——氨基酸(suan)標準工作液氨基酸(suan)s的峰面(mian)積;
F ——樣(yang)品稀釋倍數(shu)。
附、透明膠質類中的蛋白水解氨基酸其分析圖譜及做樣結果：
圖1. 樣(yang)品AE01
圖2. 樣品AE03
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