2021-08-31
Biochrom30+氨基酸分析儀氧化水解法檢測玉米胚(pei)芽(ya)粕中氨基酸
一、樣品前處理
1、所用試劑
必須使用重(zhong)蒸餾水或與(yu)之等質的水（電導(dao)率＜10μs）
1、1 雙氧(yang)水,30%
1、2 甲(jia)酸(suan)，98-100%
1、3 ; 苯酚：須重蒸(zheng)
1、4 偏重(zhong)亞硫酸鈉
1、5 ; 氫(qing)氧化鈉(na)
1、6 鹽酸，ρ＝1.18g/ml
1、7 水解劑：6mol/l 的HCL，1L含1g苯酚(fen)：
加1g苯酚（3.3）到(dao)492mL鹽酸(3.7)中，然后用水定(ding)容(rong)至1L
1、8 20種氨基(ji)酸標準品
2、標樣配置
氨基(ji)酸混合標準儲(chu)備(bei)液(ye)：稱(cheng)取上述各氨基(ji)酸標樣(yang)使用(yong)PH2.2的Load Buffer配(pei)置成2.5umol/L的儲(chu)備(bei)液(ye)備(bei)用(yong)。
取氨基(ji)酸混合標(biao)準儲備液與PH2.2的(de)(de)Load Buffer以1:9的(de)(de)比例配置成(cheng)0.25umol/L的(de)(de)標(biao)準液。
3、前處理設備
1) 天平
2) 水解管(guan)
3) 量筒
4) 無(wu)油真空泵
5) 干浴水解、濃縮儀
6) 移液(ye)管
7) 0.45um濾膜
4、 樣品制備（參考(kao)歐盟飼(si)料(liao)指令98/64/EC ）
1、樣品的準備
粉碎(sui)樣(yang)品(pin)，通過0.5mm的(de)篩孔。高(gao)水分的(de)樣(yang)品(pin)粉碎(sui)前必(bi)須(xu)低于50℃鼓風干燥或者冷(leng)凍干燥。高(gao)脂(zhi)肪含量的(de)樣(yang)品(pin)粉碎(sui)前必(bi)須(xu)用輕質石油（3.12）脫脂(zhi)。
2、氧化
從準備好的(de)(de)樣品中(zhong)稱取約(yue)0.1~1克(ke)樣品，準確到(dao)0.2mg，于100 ml帶螺紋(wen)蓋子(zi)的(de)(de)瓶子(zi)中(zhong)，稱取的(de)(de)樣品應該含有大約(yue)10mg氮，水分不能(neng)超過100mg。將瓶子(zi)放于冰水浴(yu)(yu)中(zhong)冷卻至0℃，加5ml氧化試劑(ji)(ji)（過甲酸(suan)苯酚），用帶彎(wan)頭的(de)(de)玻璃刮勺混(hun)合。用空(kong)氣(qi)密封膜將瓶子(zi)和刮勺一起(qi)密封，密封后一起(qi)放入0℃冰箱的(de)(de)冰水浴(yu)(yu)中(zhong)，放置16小(xiao)時(shi)。之后，從冰箱中(zhong)取出(chu)，加0.84克(ke)偏重亞硫酸(suan)鈉（3.4）來分解過量的(de)(de)氧化試劑(ji)(ji)。
3、水解
加入(ru)25毫(hao)升(sheng)鹽酸(suan)-苯酚溶(rong)液, 然(ran)后(hou)將反(fan)應瓶放在烘箱中，溫度(du)控制(zhi)在110攝(she)氏度(du)，旋松帽子(zi)(zi)（防(fang)止玻(bo)璃瓶子(zi)(zi)破裂(lie)），水解1小時。然(ran)后(hou)快速旋緊瓶塞（戴手套和護眼罩）將其繼續在烘箱110攝(she)氏度(du)下水解23小時。
4、加入內標并(bing)且調節pH值到2.20
當水(shui)解反應結(jie)束后，將反應瓶從烘箱中取出，并且打開瓶口（戴手套和護目鏡）。冷卻(que)后用(yong)定量(liang)加(jia)樣器(qi)準確加(jia)入(ru)15.00克(15毫(hao)(hao)升(sheng))正亮氨酸(suan)標準溶(rong)(rong)液(ye)，混合(he)并且轉移(yi)水(shui)解溶(rong)(rong)液(ye)到(dao)250毫(hao)(hao)升(sheng)的塑料燒杯中。加(jia)入(ru)大約125毫(hao)(hao)升(sheng)檸檬酸(suan)緩沖液(ye)和19毫(hao)(hao)升(sheng)氫氧化(hua)鈉水(shui)溶(rong)(rong)液(ye),將實驗燒杯放入(ru)到(dao)樣品(pin)容器(qi)中用(yong)氫氧化(hua)鈉水(shui)溶(rong)(rong)液(ye)將溶(rong)(rong)液(ye)調節(jie)到(dao)pH為正好2.20。
轉移一部分(fen)溶液（不需要全部）到50毫升有蓋子的塑料瓶中。可以馬(ma)上測定或者放入冰箱等到分(fen)析的時候測定。
二、分析方法描述(shu)（Biochrom 30+）
氨基(ji)酸分(fen)(fen)析(xi)儀分(fen)(fen)析(xi)方(fang)法參數：
1) 色譜柱(zhu)：Biochrom Na型陽離(li)子交換樹脂柱(zhu)，4.6′20cm
2) 分離程序：
3) 運行(xing)時(shi)間：分析時(shi)間65min
4) 反(fan)應單元(yuan)溫(wen)度：135°C。
5) 檢測波長：570nm、440nm同時檢測。
三、外標法定量
附、玉米胚(pei)芽粕分(fen)析圖譜
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