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氨基酸分析儀檢測透明膠質類中的蛋白水氨基酸

2023-09-27

摘要:

本(ben)品為(wei)未(wei)知含(han)(han)(han)量(liang)及種類(lei)(lei)的(de)氨(an)基酸(suan)(suan)配制(zhi)而(er)成(cheng)的(de)透明膠質類(lei)(lei)物質,使用Biochrom30+全自動氨(an)基酸(suan)(suan)分析儀,對其(qi)所含(han)(han)(han)的(de)游(you)離氨(an)基酸(suan)(suan)組分及含(han)(han)(han)量(liang)進行分析。結(jie)果表(biao)明該未(wei)知樣(yang)中(zhong)氨(an)基酸(suan)(suan)各單個氨(an)基酸(suan)(suan)含(han)(han)(han)量(liang)的(de)濃度(du)見附頁結(jie)果表(biao)。其(qi)中(zhong)樣(yang)AE01氨(an)基酸(suan)(suan)總含(han)(han)(han)量(liang)為(wei)31.969 umol/mL,AE03氨(an)基酸(suan)(suan)總含(han)(han)(han)量(liang)為(wei)36.790 umol/mL。



一、樣品前處理

1、所用試劑

1.1 Loading Buffer:鈉(na)鹽系統,pH 2.2

1.2 濃(nong)鹽酸,濃(nong)度≥36%,優(you)級(ji)純

1.3 6mol/L 鹽酸:取500mL 鹽酸加水稀釋至(zhi)1000mL,混(hun)勻

1.4 水(shui):去離子水(shui)

1.5 17種氨基酸(suan)標準品(pin)




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2、前處理設備

1) 分析天平(ping):精度為 0.0001g

2) 移液槍及槍頭

3) 一次(ci)性注射(she)器及0.22um濾膜

4) 低范圍(wei)pH試紙

5) 真空干燥烘箱

6) 無油真空泵

7) 電熱平板及稱量瓶


3、樣品制備(參考shipinzhongAAS的測定)

移液槍(qiang)準確移取(qu)(qu)試(shi)樣1mL,加(jia)入(ru)(ru)水(shui)解(jie)管中(zhong)(zhong),加(jia)入(ru)(ru)10mL 6mol/L鹽酸(1.3),冷凍(dong)3min?5min,接到真(zhen)空(kong)(kong)(kong)泵(beng)的抽氣(qi)管上,抽真(zhen)空(kong)(kong)(kong)(接近(jin)0Pa),然后(hou)(hou)充入(ru)(ru)氮(dan)氣(qi),重(zhong)復抽真(zhen)空(kong)(kong)(kong)-充入(ru)(ru)氮(dan)氣(qi)步(bu)驟3次(ci)后(hou)(hou),在(zai)(zai)充氮(dan)氣(qi)狀態(tai)下擰緊螺蓋。將水(shui)解(jie)管放入(ru)(ru)真(zhen)空(kong)(kong)(kong)干(gan)燥箱中(zhong)(zhong),110°C水(shui)解(jie)22-24h,冷卻、混勻、開管、轉移并定(ding)容到50ml容量瓶(ping)中(zhong)(zhong),用移液槍(qiang)取(qu)(qu)適量水(shui)解(jie)液于稱(cheng)量瓶(ping)中(zhong)(zhong),在(zai)(zai)電熱平板上60℃濃縮至干(gan),必要(yao)時加(jia)入(ru)(ru)少許水(shui)(1.4),重(zhong)復蒸(zheng)干(gan)1-2次(ci),加(jia)入(ru)(ru)適量PH2.2的稀釋(shi)上機用檸(ning)檬酸鈉緩沖液溶解(jie)(1.1),振蕩(dang)混勻后(hou)(hou),吸取(qu)(qu)溶液通(tong)過(guo)0.22 μm 濾膜后(hou)(hou),轉移至進(jin)樣瓶(ping),為樣品測(ce)定(ding)液,供(gong)儀器(qi)測(ce)定(ding)用。


二、分析方法描述(Biochrom 30+)

氨基酸分析儀分析方法參數:

1) 色譜柱:Biochrom Na型陽(yang)離子交換樹脂柱,4.6′20cm

2) 分離程序:

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運行時間:經分析時間+再生時間 59.35min

3) 反應單元溫度:135°C

4) 檢(jian)測(ce)波長:570nm、440nm同時檢(jian)測(ce)


三(san)、樣品中氨基酸含量(liang)的計算

樣品測定液氨基酸的含量按式(1)計算:

Ci = Cs/As × Ai× F ··········(1)式中:

Ci ——樣品測定(ding)液(ye)氨基酸i的(de)含(han)量,單位為納摩爾每毫(hao)升(nmol/mL);

Cs ——氨基(ji)酸(suan)標準(zhun)工作液氨基(ji)酸(suan)s的含(han)量(liang),單位(wei)為(wei)納摩爾每毫(hao)升(sheng)(nmol/mL);

Ai ——試(shi)樣測定液氨基酸i的(de)峰面積(ji);

As ——氨(an)基(ji)酸標準工(gong)作(zuo)液(ye)氨(an)基(ji)酸s的峰面(mian)積;

F ——樣品稀釋(shi)倍數。


附、透明膠質類中的蛋白水解氨基酸其分析圖譜及做樣結果:

圖1.  樣品AE01

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圖2.  樣品AE03

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大(da)(da)昌華嘉(jia)儀器部專(zhuan)業提供分析儀器及設(she)備,代(dai)理眾(zhong)多歐美先進儀器,產(chan)(chan)品(pin)(pin)(pin)范圍包括(kuo):顆粒,物理,化學,生(sheng)化,通(tong)用實驗(yan)室的(de)各類(lei)分析儀器以(yi)及流程儀表設(she)備,在(zai)中國(guo)的(de)石化,化工,制藥(yao),食品(pin)(pin)(pin),飲料,農業科技(ji)等諸多領域擁有大(da)(da)量用戶,具有良好的(de)市場聲譽(yu)。我們的(de)業務(wu)逐年(nian)增加(jia),市場不(bu)斷(duan)擴大(da)(da)。大(da)(da)昌華嘉(jia)公(gong)司(si)在(zai)中國(guo)設(she)有多個銷售(shou),服務(wu)網(wang)點,旨在(zai)為客(ke)戶提供全(quan)方(fang)位的(de)產(chan)(chan)品(pin)(pin)(pin)和服務(wu)。

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