2023-08-30
摘要：
本品為未(wei)知含(han)(han)(han)量(liang)及種類的氨(an)(an)基酸(suan)配(pei)制而成的透明(ming)膠質(zhi)類物質(zhi)，使(shi)用Biochrom30+全自動氨(an)(an)基酸(suan)分(fen)析儀，對其(qi)所含(han)(han)(han)的游離氨(an)(an)基酸(suan)組分(fen)及含(han)(han)(han)量(liang)進行分(fen)析。結(jie)果表(biao)(biao)明(ming)該未(wei)知樣(yang)中(zhong)氨(an)(an)基酸(suan)各單個(ge)氨(an)(an)基酸(suan)含(han)(han)(han)量(liang)的濃度(du)見附頁結(jie)果表(biao)(biao)。其(qi)中(zhong)樣(yang)AE01氨(an)(an)基酸(suan)總含(han)(han)(han)量(liang)為31.969 umol/mL，AE03氨(an)(an)基酸(suan)總含(han)(han)(han)量(liang)為36.790 umol/mL。
一、樣品前處理
1、所用試劑
1.1 Loading Buffer：鈉鹽系統，pH 2.2
1.2 濃(nong)鹽酸，濃(nong)度≥36%,優級純
1.3 6mol/L 鹽酸：取500mL 鹽酸加水稀釋至1000mL,混勻
1.4 水：去離(li)子水
1.5 17種氨基酸標準品
2、前處理設備
1) 分析天平:精(jing)度為 0.0001g
2) 移液槍及槍頭
3) 一次性注(zhu)射器及0.22um濾(lv)膜(mo)
4) 低范圍pH試紙(zhi)
5) 真空干燥烘箱
6) 無油真空泵
7) 電熱平板及稱(cheng)量(liang)瓶
3、樣品制備（參考shipinzhongAAS的測定）
移液(ye)槍準確(que)移取(qu)試(shi)樣(yang)1mL，加(jia)入(ru)(ru)(ru)水解(jie)管中，加(jia)入(ru)(ru)(ru)10mL 6mol/L鹽酸(suan)(1.3)，冷(leng)凍3min?5min,接到真(zhen)空泵的抽氣管上,抽真(zhen)空(接近0Pa),然后(hou)充入(ru)(ru)(ru)氮(dan)(dan)氣,重復抽真(zhen)空-充入(ru)(ru)(ru)氮(dan)(dan)氣步驟(zou)3次后(hou),在充氮(dan)(dan)氣狀態下擰緊螺蓋。將水解(jie)管放入(ru)(ru)(ru)真(zhen)空干(gan)燥箱中，110°C水解(jie)22-24h，冷(leng)卻、混(hun)勻(yun)、開(kai)管、轉移并定(ding)(ding)容到50ml容量(liang)(liang)(liang)瓶(ping)(ping)中，用移液(ye)槍取(qu)適(shi)(shi)量(liang)(liang)(liang)水解(jie)液(ye)于稱量(liang)(liang)(liang)瓶(ping)(ping)中，在電熱平板上60℃濃縮至干(gan)，必要(yao)時加(jia)入(ru)(ru)(ru)少許水(1.4)，重復蒸干(gan)1-2次，加(jia)入(ru)(ru)(ru)適(shi)(shi)量(liang)(liang)(liang)PH2.2的稀釋上機(ji)用檸檬酸(suan)鈉(na)緩沖液(ye)溶解(jie)(1.1),振蕩混(hun)勻(yun)后(hou),吸取(qu)溶液(ye)通(tong)過0.22 μm 濾膜后(hou),轉移至進樣(yang)瓶(ping)(ping),為(wei)樣(yang)品測定(ding)(ding)液(ye),供儀器測定(ding)(ding)用。
二、分析方法描述（Biochrom 30+）
氨基酸分析儀分析方法參數：
1) 色譜柱：Biochrom Na型(xing)陽離子(zi)交換樹脂柱，4.6′20cm
2) 分離程序：
運行時間(jian)：經分析時間(jian)+再生時間(jian) 59.35min
3) 反應單元溫度：135°C
4) 檢(jian)測(ce)波長(chang)：570nm、440nm同時檢(jian)測(ce)
三(san)、樣品中氨(an)基酸含(han)量(liang)的(de)計算
樣品測定液氨基酸的含量按式(1)計算：
Ci = Cs/As × Ai× F ··········(1)式中:
Ci ——樣品測(ce)定液(ye)氨基酸(suan)i的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL);
Cs ——氨基(ji)酸標準工作液氨基(ji)酸s的含量,單位為納(na)摩爾(er)每毫升(sheng)(nmol/mL);
Ai ——試樣測(ce)定(ding)液(ye)氨(an)基酸(suan)i的峰面積(ji);
As ——氨基(ji)酸標(biao)準工(gong)作液(ye)氨基(ji)酸s的峰面積;
F ——樣品(pin)稀釋(shi)倍數。
附、透明膠質類中的蛋白水解氨基酸其分析圖譜及做樣結果：
圖1. 樣品(pin)AE01
圖2. 樣品AE03
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