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Biochrom30+氨基酸分析儀檢測花鯧中水解氨基酸

2021-02-08

摘要：

以花(hua)鯧為原料，使用Biochrom30+全自(zi)動氨(an)基(ji)酸(suan)自(zi)動分(fen)析儀(yi)對(dui)其肌肉(rou)的(de)氨(an)基(ji)酸(suan)組成(cheng)進行分(fen)析。結果表明花鯧肌肉(rou)中氨(an)基(ji)酸(suan)總量的(de)質量百分(fen)比為14443.578mg/100g，必需(xu)氨基酸(不(bu)含色氨酸)占氨基(ji)酸總量的39.59%，鮮味氨基酸占氨基酸總(zong)量(liang)的38.73%。

1. 樣品(pin)前(qian)處理

2. 所用試劑

   1. 濃鹽酸，濃(nong)度≥36%,優級(ji)純

   2. 6mol/L 鹽(yan)酸：取500mL 鹽(yan)酸加水稀釋至1000mL,混(hun)勻。

   3. 水(shui)：去離子水(shui)

   4. 苯酚：須重蒸

   5. 17種氨基酸標(biao)準品

1. 前處理設備(bei)

2. 分析天平:感(gan)量(liang)分別為 0.0001g和0.00001g。

3. 水解(jie)管:耐壓螺蓋玻(bo)璃試管,體(ti)(ti)積為(wei)25mL

4. 勻漿機(ji)。

5. 無油真空泵

6. 干(gan)浴水解濃縮儀

7. 移液管(guan)

8. 0.22um濾膜

    

9. 樣(yang)品(pin)制備（參考國標GB 5009.124-2016）

   原料(liao)魚(yu)(yu)手工(gong)去除魚(yu)(yu)鱗(lin)、魚(yu)(yu)皮、魚(yu)(yu)刺(ci)和內臟，采肉后清洗、瀝干，在勻漿機中(zhong)打成肉糜，于-18℃冰箱(xiang)中冷凍保存(cun)，分(fen)析時取(qu)出解凍后使用。

    

10. 試樣水解

    稱取含蛋白7.5-25mg的試樣，加(jia)入(ru)水解管中(zhong)，加(jia)入(ru)15mL 6mol/L鹽酸(suan)，繼(ji)續向水(shui)解管內加入(ru)(ru)苯酚3滴~4滴。冷凍(dong)3min~5min,接(jie)到真空泵(beng)的抽氣(qi)管上,抽真空(接(jie)近0Pa),然后充入(ru)(ru)氮(dan)氣(qi),重(zhong)復抽真空-充入(ru)(ru)氮(dan)氣(qi)3次后,在充氮(dan)氣(qi)狀態(tai)下(xia)擰緊(jin)螺蓋。 將(jiang)水解管(guan)放入干浴水解濃縮儀中，110°C水(shui)解22-24h，冷卻、混勻(yun)、開(kai)管(guan)、轉移(yi)并定容到(dao)50ml容(rong)量(liang)瓶(ping)中，用移液(ye)管取(qu)適(shi)量(liang)樣液(ye)，在干浴水解濃縮(suo)儀中50°C吹干(gan)，必要時加入少許水(shui)，重(zhong)復吹干(gan)1-2次，加(jia)入3-5mL PH2.2的稀釋上機用(yong)檸檬酸鈉緩(huan)沖液(ye)溶解,振蕩(dang)混勻后,吸取溶液通過0.22μm 濾膜后,轉移至儀器進(jin)樣瓶,為樣品測定(ding)液,供儀器測定(ding)用。

     

11. 分析方法描述（Biochrom 30+）

    氨基酸(suan)分析儀(yi)分析方法(fa)參數：

12. 色譜柱：Biochrom Na型(xing)陽離子交(jiao)換(huan)樹脂柱(zhu)，4.6´20cm

13. 分離程序：

1. 運行時間(jian)：經分析時間(jian)+再生時間(jian) 57min

2. 反(fan)應單(dan)元溫度：135°C。

3. 檢測波(bo)長(chang)：570nm、440nm同時檢測。

    

    

4. 樣品中氨基酸(suan)含量的計(ji)算(suan)

      樣品測定液氨基酸(suan)的含量按式(2)計算:

   ci = cs /As ×Ai                 ……………………(2)

   式中:

   ci ———樣品測定(ding)液氨(an)基酸i的(de)含量(liang),單(dan)位(wei)為(wei)納摩(mo)爾每毫升(nmol/mL);

   Ai ———試樣測定液氨基酸i的峰面積;

   As ———氨基酸標準工作液氨基酸s的峰面(mian)積;

   cs ———氨(an)(an)基酸標準工作液氨(an)(an)基酸s的含(han)量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL)。

    

   試樣(yang)中(zhong)各氨(an)基(ji)酸的含量(liang)按(an)式(3)計算:

   Xi = (ci ×F ×V ×M)/ (m ×10⁹) ×100 ……………………(3)

   式(shi)中(zhong):

   Xi ———試樣中氨基(ji)酸i的含量,單位為克每百克(g/100g);

   ci ———試樣(yang)測定液中氨基酸i的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL);

   F ———稀釋倍數;

   V ———試樣水解液轉(zhuan)移定容(rong)的(de)體積(ji),單位為毫升(mL);

   M ———氨基(ji)酸i的(de)摩(mo)爾質量,單位為(wei)克(ke)每(mei)摩(mo)爾(g/mol);

   m ———稱樣(yang)量,單位為(wei)克(g);

   10⁹ ———將試樣含量(liang)由納克(ke)(ng)折算成克(ke)(g)的(de)系數;

   100 ———換算(suan)系數。

    

    

    

    

    

附、花(hua)鯧分析圖譜及(ji)做(zuo)樣結(jie)果(guo)