2020-11-02
介(jie)紹
蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)被用(yong)在很多領域，比如(ru)食物(wu)，制藥(yao)(yao)學(xue)(xue)(xue)、生物(wu)化學(xue)(xue)(xue)、生物(wu)學(xue)(xue)(xue)，而(er)且經(jing)常(chang)是(shi)比較高(gao)的(de)(de)濃度(du)(du)(du)。醫學(xue)(xue)(xue)領域為(wei)了(le)藥(yao)(yao)物(wu)適(shi)合(he)長期服用(yong)或(huo)減少(shao)注射次數，蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)濃度(du)(du)(du)通常(chang)較高(gao)，這時(shi)科學(xue)(xue)(xue)儀器表征(zheng)方法很大程(cheng)度(du)(du)(du)上受到高(gao)度(du)(du)(du)濃縮(suo)的(de)(de)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)分(fen)散性(xing)(xing)的(de)(de)挑戰。高(gao)濃度(du)(du)(du)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)懸浮液出現不穩定(ding)性(xing)(xing)的(de)(de)影響因(yin)素有溫度(du)(du)(du)，鹽濃度(du)(du)(du)和氨基(ji)酸加量等。蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)的(de)(de)變性(xing)(xing)程(cheng)度(du)(du)(du)經(jing)常(chang)用(yong)粘度(du)(du)(du)來表征(zheng)，如(ru)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)質(zhi)變性(xing)(xing)導致(zhi)粘度(du)(du)(du)增(zeng)加。DLS或(huo)zeta電位(wei)也是(shi)常(chang)用(yong)方法，缺(que)點是(shi)需要(yao)稀(xi)釋，可能改變分(fen)散狀態(tai)。
在這篇文章(zhang)中(zhong)，我們使用Turbiscan監測蛋(dan)白質(zhi)的(de)聚集過(guo)程(cheng)中(zhong)的(de)平均直徑變(bian)化(hua)。多重光散(san)射技(ji)術(shu)的(de)優點(dian)是可以在不稀釋狀態下，分析它們的(de)自然形態變(bian)化(hua)過(guo)程(cheng)。
材料&方(fang)法(fa)
實驗溫度(du)(du)60℃，濃度(du)(du)為10wt%牛血清(qing)白蛋白(BSA)分散(san)在水中，加入不同濃度(du)(du)的氨(an)基酸(suan)組氨(an)酸(suan)(3 ~ 20nm)，用Turbiscan Tower多重光散(san)射儀(yi)進行測量。
結果與討論
溫度升高導致(zhi)蛋白(bai)質尺寸增加，改變(bian)相互作(zuo)用，使溶液從(cong)透(tou)(tou)明變(bian)得渾濁，導致(zhi)蛋白(bai)質變(bian)性。組氨酸(suan)(suan)和氨基酸(suan)(suan)常用于(yu)防止(zhi)蛋白(bai)質變(bian)性。室溫下濃度為10%wt 的(de)BSA蛋白(bai)溶液是透(tou)(tou)明的(de)。組氨酸(suan)(suan)加量較少的(de)樣品(pin)，在60°C從(cong)透(tou)(tou)明到不透(tou)(tou)明發生變(bian)質，如Figure 1所示(shi)。
Figure 2為非稀釋(shi)狀態下(xia)BSA蛋(dan)白粒徑隨時間變化曲(qu)線，Figure 3為不(bu)同(tong)組(zu)氨(an)酸加量(liang)的(de)蛋(dan)白在20h的(de)粒徑對比圖。
可以看出組氨酸對(dui)BSA蛋白(bai)的變性（粒徑增(zeng)加）有明顯的抑.制(zhi)作用。
結論(lun)
基于靜態多重光散射(she)的turbiscan技術可(ke)以用來蛋白質變性(xing)過(guo)程(cheng)，濃(nong)度范(fan)圍(wei)(wei)介于0.0001和(he)95%之(zhi)間，粒徑(jing)范(fan)圍(wei)(wei)適(shi)用于10nm和(he)1000µm之(zhi)間，這種方法的優點是可(ke)以在不(bu)稀釋狀態下，原位測量樣(yang)品的粒徑(jing)變化(hua)過(guo)程(cheng)和(he)不(bu)穩定現象。
Formulaction
穩定性分析儀Turbiscan AGS
專為大批量(liang)研發(fa)部(bu)(bu)門和質檢部(bu)(bu)門設計。Turbiscan Lab 與全自(zi)動機(ji)(ji)械(xie)(xie)手的wanmei結合。全自(zi)動機(ji)(ji)械(xie)(xie)手包括(kuo)3個(ge)(ge)獨立的恒(heng)(heng)溫槽(cao)和一個(ge)(ge)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)輸送的機(ji)(ji)械(xie)(xie)臂(bei)。每個(ge)(ge)恒(heng)(heng)溫槽(cao)中有18個(ge)(ge)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)槽(cao)，一共可以存儲54個(ge)(ge)樣(yang)(yang)品(pin)(pin)依次(ci)(ci)測量(liang)。恒(heng)(heng)溫槽(cao)溫度控制從室溫+5℃到60℃，樣(yang)(yang)品(pin)(pin)輸送的機(ji)(ji)械(xie)(xie)臂(bei)每小時運行60次(ci)(ci)，可連續7天不間(jian)斷(duan)工(gong)作。
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