2020-05-13
一、樣品前處理
1、所用試劑
1、1 濃鹽酸，優級(ji)純(chun)
1、2 6mol/L 鹽酸：濃鹽酸與水1:1混(hun)合
1、3 水：去離子水
1、4 苯酚：須重(zhong)蒸
1、5 19種氨基酸(suan)標準(zhun)品
2、標樣配置
氨基酸混合(he)標準儲備液：含有天冬氨酸、蘇氨酸等17種常見組(zu)成蛋白質的氨基酸。
牛磺酸(suan)標準(zhun)儲(chu)備(bei)液：用(yong)PH2.2的(de)檸檬酸(suan)緩沖液配置成(cheng)2.5umol/L的(de)儲(chu)備(bei)液備(bei)用(yong)。
正亮氨酸標(biao)準(zhun)儲備液(ye)：用PH2.2的(de)檸檬酸緩沖液(ye)配置(zhi)成2.5umol/L的(de)儲備液(ye)備用。
璜(huang)基丙(bing)氨酸(suan)標(biao)準儲備(bei)液：用PH2.2的檸(ning)檬酸(suan)緩(huan)沖液配置成(cheng)2.5umol/L的儲備(bei)液備(bei)用。
蛋氨(an)酸(suan)砜標準儲(chu)備液：用PH2.2的(de)檸檬酸(suan)緩沖液配置成2.5umol/L的(de)儲(chu)備液備用。
羥脯氨酸標準儲備(bei)(bei)液：用(yong)PH2.2的檸檬酸緩沖液配置(zhi)成2.5umol/L的儲備(bei)(bei)液備(bei)(bei)用(yong)。
鳥氨酸標準儲備(bei)(bei)液(ye)：用PH2.2的檸檬(meng)酸緩沖(chong)液(ye)配置成(cheng)2.5umol/L的儲備(bei)(bei)液(ye)備(bei)(bei)用。
將17種氨(an)基酸混合標準儲(chu)備液、牛磺酸、正亮氨(an)酸、璜基丙氨(an)酸、蛋氨(an)酸砜(feng)、羥脯(fu)氨(an)酸、鳥氨(an)酸及PH2.2的(de)檸檬酸緩沖液按照1:1:1:1:1:1:1:3配置成0.25umol/L的(de)標準品(pin)待用。
3、前處理設備
1) 天平
2) 水解(jie)管(guan)
3) 量筒(tong)
4) 無油真空泵
5) 干浴水解(jie)、濃縮儀
6) 移液管
7) 0.45um濾膜
4、樣品制備（參考歐盟飼料指令98/64/EC ）
1、樣品的準備
粉(fen)(fen)碎樣品(pin)(pin)，通過0.5mm的篩孔。高水分(fen)的樣品(pin)(pin)粉(fen)(fen)碎前必須低于50℃鼓風干燥或者冷凍干燥。高脂肪含量的樣品(pin)(pin)粉(fen)(fen)碎前必須用輕質石(shi)油（3.12）脫脂。
2、氧化
從準(zhun)備(bei)好的樣(yang)品中(zhong)稱取約0.1~1克樣(yang)品，準(zhun)確(que)到0.2mg，于(yu)100 ml帶螺(luo)紋(wen)蓋子(zi)(zi)的瓶(ping)(ping)子(zi)(zi)中(zhong)，稱取的樣(yang)品應該含有大約10mg氮，水分不能超過100mg。將瓶(ping)(ping)子(zi)(zi)放(fang)于(yu)冰(bing)水浴中(zhong)冷卻至0℃，加(jia)5ml氧化試(shi)劑（過甲酸(suan)苯酚），用帶彎頭的玻(bo)璃刮勺混(hun)合(he)。用空氣密封(feng)膜(mo)將瓶(ping)(ping)子(zi)(zi)和刮勺一(yi)起(qi)密封(feng)，密封(feng)后一(yi)起(qi)放(fang)入(ru)0℃冰(bing)箱的冰(bing)水浴中(zhong)，放(fang)置(zhi)16小時。之(zhi)后，從冰(bing)箱中(zhong)取出，加(jia)0.84克偏重亞硫酸(suan)鈉（3.4）來分解過量的氧化試(shi)劑。
3、水解
加入(ru)25毫(hao)升(sheng)鹽酸(suan)-苯(ben)酚溶液, 然后將反(fan)應(ying)瓶放(fang)在烘(hong)箱中，溫度(du)(du)控制在110攝(she)(she)氏(shi)度(du)(du)，旋松(song)帽子（防(fang)止玻璃瓶子破裂），水解(jie)(jie)1小(xiao)時(shi)。然后快(kuai)速旋緊瓶塞（戴手套(tao)和護(hu)眼罩）將其(qi)繼續在烘(hong)箱110攝(she)(she)氏(shi)度(du)(du)下水解(jie)(jie)23小(xiao)時(shi)。
4、加(jia)入內標并且(qie)調(diao)節pH值到2.20
當水(shui)(shui)解(jie)反應(ying)結束后，將反應(ying)瓶(ping)從烘箱中(zhong)(zhong)取出，并且(qie)打開瓶(ping)口（戴手套(tao)和(he)護目鏡）。冷卻后用(yong)定(ding)量加(jia)樣(yang)(yang)器準確加(jia)入(ru)(ru)15.00克(15毫(hao)(hao)升(sheng)(sheng))正亮(liang)氨酸標準溶(rong)液(ye)(ye)(ye)(ye)，混合并且(qie)轉(zhuan)移水(shui)(shui)解(jie)溶(rong)液(ye)(ye)(ye)(ye)到250毫(hao)(hao)升(sheng)(sheng)的塑料燒(shao)杯中(zhong)(zhong)。加(jia)入(ru)(ru)大約125毫(hao)(hao)升(sheng)(sheng)檸檬(meng)酸緩沖液(ye)(ye)(ye)(ye)和(he)19毫(hao)(hao)升(sheng)(sheng)氫氧化鈉水(shui)(shui)溶(rong)液(ye)(ye)(ye)(ye),將實驗燒(shao)杯放入(ru)(ru)到樣(yang)(yang)品(pin)容器中(zhong)(zhong)用(yong)氫氧化鈉水(shui)(shui)溶(rong)液(ye)(ye)(ye)(ye)將溶(rong)液(ye)(ye)(ye)(ye)調(diao)節(jie)到pH為正好2.20。轉(zhuan)移一部分(fen)溶(rong)液(ye)(ye)(ye)(ye)（不需要全部）到50毫(hao)(hao)升(sheng)(sheng)有蓋子的塑料瓶(ping)中(zhong)(zhong)。可以馬上測定(ding)或者放入(ru)(ru)冰箱等(deng)到分(fen)析的時候測定(ding)。
二、分析方法描(miao)述（Biochrom 30+）
氨基酸分析儀(yi)分析方法(fa)參數(shu)：
1) 色譜(pu)柱：Biochrom Na型陽離子(zi)交(jiao)換樹脂柱，4.6X20cm
2) 分離(li)程序：
3) 運(yun)行時間：分析時間65min
4) ; 反應單(dan)元溫(wen)度(du)：135°C。
5) 檢測波(bo)長：570nm、440nm同時檢測。
附、魚料分(fen)析(xi)圖譜(pu)及做樣結果
在線客服