2020-03-27
FlowCam具備高靈敏(min)度，高質(zhi)量的顆(ke)(ke)粒(li)圖(tu)像，精確(que)的濃度檢測(ce)和直測(ce)粒(li)徑等性能，從一次(ci)實驗(yan)結果(guo)中(zhong)就能夠獲得“顆(ke)(ke)粒(li)有(you)多(duo)少(shao)”，“顆(ke)(ke)粒(li)有(you)多(duo)大”，“顆(ke)(ke)粒(li)是什(shen)么”等信息。
目的(de)：研究(jiu)建立抗程(cheng)序性死亡受(shou)體配體 1（programmed cell death protein ligand 1，PD-L1）單抗的(de)質量控制方法。
方法：利用成像毛細管等電聚焦電泳（imaging capillary isoelectric focusing electrophoresis，iCIEF）、肽圖對抗 PD-L1 單抗進行鑒別；利用還原 / 非還原十二烷基磺酸鈉毛細管電泳 （capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfonate，CE-SDS）、分子排阻高效液相色譜（size exclusion-high performance liquid chromatography，SEC-HPLC）、離子交換高效液相色譜（ion exchange-high performance liquid chromatography，IEC-HPLC）對抗 PD-L1 單抗的純度進行控制；利用細胞結合抑制法和轉基因細胞法測定抗 PD-L1 單抗的活性；利用光阻法和液流成像分析法對不溶性微粒進行檢測和分析。
結果(guo)：抗(kang) PD-L1 單抗(kang)的(de) iCIEF 檢(jian)(jian)測(ce)(ce)結果(guo)具有(you)特(te)征(zheng)性主峰(feng)(feng)(feng)，肽圖檢(jian)(jian)測(ce)(ce)具有(you)相應特(te)征(zheng)峰(feng)(feng)(feng)，起到很好的(de)鑒別作用(yong)。還(huan)原 CE-SDS 的(de)輕鏈(lian)與(yu)重鏈(lian)峰(feng)(feng)(feng)面(mian)(mian)積(ji)之和的(de)百分(fen)(fen)比為(wei)（98.37±0.21）%，非還(huan)原 CE-SDS 主峰(feng)(feng)(feng)峰(feng)(feng)(feng)面(mian)(mian)積(ji)百分(fen)(fen)比為(wei)（96.33±0.15）%；SEC-HPLC 單體(ti)的(de)峰(feng)(feng)(feng)面(mian)(mian)積(ji)百分(fen)(fen)比為(wei)（99.43±0.02）%；IEC-HPLC 酸性區峰(feng)(feng)(feng)面(mian)(mian)積(ji)百分(fen)(fen)比、主峰(feng)(feng)(feng)峰(feng)(feng)(feng)面(mian)(mian)積(ji)百分(fen)(fen)比、堿性區峰(feng)(feng)(feng)面(mian)(mian)積(ji)百分(fen)(fen)比分(fen)(fen)別為(wei)（13.63±0.40）%、（80.00±0.36）%、（6.37±0.15）%。細(xi)胞結合(he)抑制法(fa)與(yu)轉(zhuan)基因(yin)細(xi)胞法(fa)的(de)活性檢(jian)(jian)測(ce)(ce)均呈現(xian)劑(ji)量反(fan)應曲線(xian)，反(fan)映抗(kang) PD-L1 單抗(kang)劑(ji)量依賴性地阻斷程序性死亡受體(ti) 1（programmed cell death protein 1，PD-1）與(yu) PD-L1 的(de)結合(he)及(ji)后續的(de)生物(wu)學效應。光阻法(fa)檢(jian)(jian)測(ce)(ce)≥ 10 μm 及(ji)≥ 25 μm 的(de)不溶性微粒數分(fen)(fen)別為(wei)（1.33±0.58）粒·mL -1 和（0.00±0.00）粒·mL -1 ；液流成(cheng)像分(fen)(fen)析(xi)法(fa)檢(jian)(jian)測(ce)(ce) 2~10 μm、≥ 10 μm及(ji)≥ 25 μm 的(de)微粒數分(fen)(fen)別為(wei)（1 243.67±242）粒·mL -1 、（45.67±16.07）粒·mL -1 和（10.00±5.00）粒·mL -1 ，其中，蛋白聚體(ti)占 87.45%，非蛋白聚體(ti)占 12.55%。
圖(tu) 1 抗(kang) PD-L1 單抗(kang)參比品（A）與樣品（B）的(de) iCIEF 代表(biao)圖(tu)譜
圖 2 抗 PD-L1 單抗參比(bi)品（A）與(yu)樣品（B）的肽圖代表圖譜
討(tao)論：研究建立了抗(kang) PD-L1 單(dan)抗(kang)的多(duo)種質控方法，為國內抗(kang) PD-L1 單(dan)抗(kang)的質量檢(jian)測提供了參考依(yi)據。
郭莎，王開芹(qin)等，抗(kang) PD-L1 單抗(kang)的(de)質量控(kong)制研究，藥物分析雜志，2019，39（1）：13-22
Fluid Imaging Technologies(FlowCam)公司成(cheng)立于(yu)1999年美(mei)國緬因州(zhou)斯卡伯勒市，其研(yan)發(fa)并生(sheng)產(chan)的FlowCam系(xi)列(lie)儀(yi)器是將流式(shi)細胞(bao)法組(zu)合到數(shu)字成(cheng)像(xiang)顯微(wei)鏡(jing)中，基于(yu)圖像(xiang)分析(xi)(xi)法的流式(shi)動態(tai)成(cheng)像(xiang)顆粒(li)分析(xi)(xi)儀(yi)，它使(shi)顆粒(li)分析(xi)(xi)變得更(geng)快(kuai)，更(geng)簡單(dan)。具有革新(xin)意義的FlowCam系(xi)列(lie)儀(yi)器被廣泛應(ying)用于(yu)研(yan)發(fa)和質(zhi)量控制，應(ying)用涉及多(duo)個領(ling)域(yu)。
流式顆粒成像分析系統FlowCam®8000系列具有以下優點。
1.測(ce)(ce)量粒(li)度和顆粒(li)形狀-對每個顆粒(li)成像后都可(ke)以獲得30多種形態(tai)學測(ce)(ce)量結(jie)果。
2.快速(su)提供具(ju)有統計意義(yi)的結果-用(yong)戶可在過程種觀察(cha)到每分(fen)鐘數以萬(wan)計的顆(ke)粒。
3.提供*的(de)(de)成(cheng)像質(zhi)量和基于(yu)成(cheng)像法(fa)的(de)(de)測量參數-可以看到(dao)快速和準確的(de)(de)，可由(you)定量數據證明的(de)(de)檢測測量結果。
4.自(zi)動化的(de)，可建模的(de)，具有統(tong)計(ji)(ji)學意義的(de) - 基于自(zi)動識別統(tong)計(ji)(ji)軟件 - 可將(jiang)不同(tong)的(de)顆粒進行分門別類，從而節省時間(jian)。
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