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Biochrom30+氨基酸分析儀檢測石斑魚中水解氨基酸

2019-09-16

Biochrom30+氨基(ji)酸分析儀檢測石斑魚中水解(jie)氨基(ji)酸

摘(zhai)要：

以石(shi)斑(ban)魚(yu)為原(yuan)料(liao)，使用Biochrom30+全自動(dong)氨(an)基(ji)(ji)酸(suan)自動(dong)分(fen)析儀對其(qi)肌肉的(de)氨(an)基(ji)(ji)酸(suan)組成進(jin)行分(fen)析。結果表明石(shi)斑(ban)魚(yu)肌肉中氨(an)基(ji)(ji)酸(suan)總量(liang)(liang)(liang)的(de)質量(liang)(liang)(liang)百分(fen)比為17753.114mg/100g，必(bi)需(xu)氨(an)基(ji)(ji)酸(suan)(不含色(se)氨(an)酸(suan))占氨(an)基(ji)(ji)酸(suan)總量(liang)(liang)(liang)的(de)40.63%，鮮(xian)味氨(an)基(ji)(ji)酸(suan)占氨(an)基(ji)(ji)酸(suan)總量(liang)(liang)(liang)的(de)38.52%。

• 樣品前處(chu)理(li)

1. 所(suo)用(yong)試(shi)劑
   1. 濃鹽(yan)酸(suan)，濃度≥36%,優級純
   2. 6mol/L 鹽(yan)酸：取500mL 鹽酸加水(shui)稀釋至(zhi)1000mL,混勻。
   3. 水：去離子水
   4. 苯酚：須重蒸
   5. 17種氨(an)基酸(suan)標(biao)準品(pin)

1. 前處理設備

1. 分析天平:感(gan)量分別為 0.0001g和0.00001g。
2. 水解管:耐壓螺蓋(gai)玻璃試管,體積為(wei)25mL
3. 勻漿機。
4. 無(wu)油真空(kong)泵
5. 干浴水(shui)解(jie)濃(nong)縮(suo)儀(yi)
6. 移(yi)液(ye)管
7. 0.22um濾膜

1. 樣品制備（參考國標GB 5009.124-2016）

原料魚手工去除魚鱗、魚皮、魚刺和內臟，采肉后(hou)清洗、瀝干，在勻漿機(ji)中打成肉糜，于-18℃冰箱中冷凍保(bao)存，分析時取出解(jie)凍后(hou)使用。

1. 試樣水(shui)解

稱取(qu)含蛋白(bai)7.5-25mg的(de)試樣，加入(ru)水解(jie)管中，加入(ru)15mL 6mol/L鹽(yan)酸，繼續向水(shui)解管(guan)內加(jia)入(ru)苯酚3滴(di)~4滴(di)。冷凍3min~5min,接到真(zhen)空泵的抽(chou)(chou)氣管(guan)上(shang),抽(chou)(chou)真(zhen)空(接近0Pa),然后充(chong)入(ru)氮氣,重復抽(chou)(chou)真(zhen)空-充(chong)入(ru)氮氣3次后,在充(chong)氮氣狀態下(xia)擰緊(jin)螺蓋。 將水解管放(fang)入干浴水解濃縮(suo)儀中，110°C水解22-24h，冷卻、混勻、開管、轉移并定容到50ml容量瓶中，用移液管取適量樣液，在干(gan)浴水解濃縮(suo)儀中50°C吹干，必(bi)要時加入少(shao)許水(shui)，重復吹干1-2次，加入3-5mL PH2.2的(de)稀釋上機用(yong)檸檬酸鈉緩沖液(ye)溶(rong)解(jie),振蕩混勻后,吸(xi)取(qu)溶(rong)液(ye)通(tong)過0.22μm 濾膜(mo)后,轉(zhuan)移至(zhi)儀(yi)器進樣瓶(ping),為樣品測定液(ye),供儀(yi)器測定用。

• 分析方法描述（Biochrom 30+）
•  

1. 色譜柱：Biochrom Na型陽離(li)子(zi)交(jiao)換樹脂柱，4.6´20cm
2. 分(fen)離程(cheng)序：

1. 運行(xing)時間：經(jing)分析時間+再生(sheng)時間 57min
2. 反應單元溫(wen)度：135°C。
3. 檢測波(bo)長：570nm、440nm同時檢測。

• 樣品中氨基酸(suan)含量的計算

   樣品測定液氨基酸(suan)的含(han)量按式(2)計算(suan):

ci = cs /As ×Ai                 ……………………(2)

式中:

ci ———樣品測(ce)定液(ye)氨基(ji)酸i的含(han)量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL);

Ai ———試(shi)樣測定液(ye)氨(an)基酸i的峰面積;

As ———氨基(ji)酸標(biao)準工作液氨基(ji)酸s的峰面積;

cs ———氨(an)基(ji)酸標準工作液氨(an)基(ji)酸s的含量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL)。

試樣中各氨基酸(suan)的含量按式(3)計算:

Xi = (ci ×F ×V ×M)/ (m ×10⁹) ×100 ……………………(3)

式(shi)中:

Xi ———試樣(yang)中(zhong)氨基酸i的含量,單(dan)位為克(ke)每百克(ke)(g/100g);

ci ———試樣測定液(ye)中氨基酸i的含(han)量,單位為納摩爾每毫升(nmol/mL);

F ———稀釋倍數;

V ———試樣水解(jie)液轉移定(ding)容的體積,單位為毫升(mL);

M ———氨基酸i的摩爾(er)質(zhi)量,單位為克每摩爾(er)(g/mol);

m ———稱樣(yang)量,單位為(wei)克(g);

10⁹ ———將試樣含量由納克(ng)折算(suan)成克(g)的系(xi)數;

100 ———換算(suan)系數。

附、石斑魚分析圖譜(pu)及做樣(yang)結果

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